鈣結(jié)合蛋白S100A9在小鼠銅綠假單胞菌肺炎中的表達(dá)及意義.pdf

1、 目的：觀察小鼠銅綠假單胞菌肺炎肺組織中鈣結(jié)合蛋白S100A9mRNA 表達(dá),并同時(shí)測(cè)定對(duì)應(yīng)小鼠血液中 S100A9 鈣結(jié)合蛋白含量,觀察肺組織的病理改變,探討鈣結(jié)合蛋白S100A9在銅綠假單胞菌所致小鼠肺部感染中的地位與作用。方法：小鼠36只,按隨機(jī)數(shù)字表分為空白對(duì)照組12只、模型組小鼠24只。通過(guò)經(jīng)環(huán)莢膜穿刺注射銅綠假單胞菌菌液建立肺部感染模型。空白對(duì)照組(經(jīng)環(huán)莢膜注射等量的2個(gè)麥?zhǔn)蠁挝粷舛?6×108cfu/ml)0.6ml的銅

2、綠假單胞菌菌液,造模過(guò)程中死亡2只)、模型組(經(jīng)環(huán)莢膜注射等量的2個(gè)麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊你~綠假單胞菌菌液0.6ml,造模中死亡5只,分別在在3小時(shí)和9小時(shí)2個(gè)時(shí)間點(diǎn)各處死9和10只)。取小鼠右肺下葉HE染色觀察肺組織病理,觀察空白對(duì)照組,3h模型組及9h模型組的病理改變；使用普通 PCR 檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)三組小鼠肺組織中S100A9mRNAPCR 反應(yīng)進(jìn)程中的產(chǎn)量進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),最終對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,從而比較三組小鼠S100A9mRNA表達(dá),并同步

3、采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法分別測(cè)定三組小鼠血液中 S100A9以及TNF-a的含量,比較三組小鼠血液中生成S100A9鈣結(jié)合蛋白的差異及與TNF-a變化的相關(guān)系。結(jié)果：(1)病理觀察：大鼠右下肺肺組織HE染色200倍光鏡下病理結(jié)果顯示,正常對(duì)照組(1組)肺泡結(jié)構(gòu)較為均勻與清晰,有少許淋巴細(xì)胞與巨噬細(xì)胞侵潤(rùn)；模型組(3h組)主要為肺泡炎性改變,肺泡內(nèi)及周圍可見(jiàn)滲出,中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞,巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組(9h 組)

4、肺泡炎性最嚴(yán)重,肺泡內(nèi)及周圍可見(jiàn)大量滲出,大量中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞,巨噬細(xì)胞浸潤(rùn),病理炎性改變明顯重于3h組。(2)普通PCR實(shí)驗(yàn)： 本實(shí)驗(yàn)根據(jù)電泳后條帶亮度的強(qiáng)弱來(lái)判斷模板拷貝數(shù)的高低,或者是表達(dá)量的高低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出s100A9mRNA在第3h,9h組中的條帶亮度強(qiáng)度明顯高于空白組,提示S100A9表達(dá)量模型組明顯高于對(duì)照組,且經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析后3h與對(duì)照組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),與9h模型組比較(P<0.05)差異有意義。(

5、3)S100A9鈣結(jié)合蛋白ELISA檢測(cè)：結(jié)果顯示3h, 9h組外周血中S100A9的含量明顯高于空白組,且以3h組增高最明顯,3h組與空白組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)與9h組比較(P<0.05)有差異。(4)腫瘤壞死因子TNF-a的ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示：3h,9h組外周血中TNF-a的含量明顯高于空白組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。(5)通過(guò)對(duì)S100A9鈣結(jié)合蛋白與腫瘤壞死因子-a 的相關(guān)性分析后,得出兩者之間