IL-35蛋白對(duì)小鼠銅綠假單胞菌肺炎的干預(yù)作用.pdf

1、目的:研究白介素35（IL-35）蛋白在小鼠銅綠假單胞肺炎中的作用，并同步觀察其對(duì)白介素8（IL-8）和白介素17（IL-17）表達(dá)水平的影響，探討白介素35蛋白在銅綠假單胞菌肺炎中的可能效用，期望為綠假單胞菌肺炎的臨床治療提供新的治療方式和途徑。方法:1.選用雄性健康清潔級(jí)昆明小鼠90只，其鼠齡為6-8周、體重約為20-30g，按隨機(jī)分配原則分成正常對(duì)照組（生理鹽水組:30只）、肺部感染組（PA組:30只）、干預(yù)組（30只）。PA組:

2、造模前12小時(shí)自腹腔注射生理鹽水1ml，戊巴比妥鈉(50mg/kg)麻醉小鼠后固定，待麻藥顯效后，常規(guī)消毒鋪巾，依次切開小鼠頸部皮膚、皮下、皮下組織，顯露氣管上段，從氣管環(huán)狀軟骨間隙內(nèi)穿刺注入銅綠假單胞菌(PA)菌液0、03ml（2個(gè)麥?zhǔn)蠁挝粷舛燃?×108cfu/ml），以建立小鼠肺炎模型;干預(yù)組:在造模前12小時(shí)自腹腔注射白介素35蛋白1ml（含白介素35蛋白2ug），然后用戊巴比妥鈉麻醉小鼠后固定，待麻藥顯效后，常規(guī)消毒鋪巾，依次

3、切開小鼠頸部皮膚、皮下、皮下組織，顯露氣管上段，從氣管環(huán)狀軟骨間隙內(nèi)穿刺注入銅綠假單胞菌(PA)菌液0、03ml（2個(gè)麥?zhǔn)蠁挝粷舛燃?×108cfu/ml），以建立小鼠干預(yù)組模型;正常對(duì)照組:操作同前兩組，在造模前12小時(shí)自腹腔注射生理鹽水1ml，戊巴比妥麻醉小鼠后固定，其后步驟同前兩組，最后從氣管環(huán)狀軟骨間隙內(nèi)穿刺注入生理鹽水0.03ml作為正常對(duì)照。造模成功后，三個(gè)實(shí)驗(yàn)組均在第3、9、24小時(shí)隨機(jī)抓取10只小鼠，留置標(biāo)本后處死小鼠。

4、2.取各個(gè)實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)間點(diǎn)小鼠右肺肺泡灌洗液，經(jīng)離心后，用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbnent assay，ELISA)檢測各組肺泡灌洗液中IL-17、IL-8的濃度;取處死小鼠左肺大部分肺組織經(jīng)甲醛固定后，行HE染色比較肺炎炎癥的范圍和程度，取處死小鼠左肺小部分肺組織，用于制作肺組織勻漿并行細(xì)菌培養(yǎng)及菌落計(jì)數(shù)。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS19.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:1.感染組、干預(yù)組小