乳鐵蛋白對銅綠假單胞菌的殺菌作用及其機(jī)制研究.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分：乳鐵蛋白對銅綠假單胞菌生長和毒力因子表達(dá)的調(diào)節(jié)及其機(jī)制
　　 目的：研究乳鐵蛋白對銅綠假單胞菌的殺菌性以及毒力因子表達(dá)和生物被膜形成的作用，同時探討鐵離子對其作用的影響。
　　 方法：分別將乳鐵蛋白溶液、FeCl3溶液及乳鐵蛋白與FeCl3混合溶液分別加入到銅綠假單胞菌培養(yǎng)基（OD600=0.05）中，以倍比稀釋平板培養(yǎng)法檢測活菌數(shù)評價其殺菌活性；以氯仿、鹽酸萃取法定量檢測綠膿

2、菌素；以剛果紅彈性蛋白檢測彈性蛋白酶活性；結(jié)晶紫法定量檢測生物被膜；以結(jié)晶紫染色法，在光鏡下觀察生物被膜形態(tài)。
　　 結(jié)果：乳鐵蛋白對銅綠假單胞菌具有殺菌活性，同時抑制綠膿菌素生成、彈性蛋白酶活性和生物被膜形成，其作用與濃度成正相關(guān)；FeCl3促進(jìn)銅綠假單胞菌生長，增加綠膿菌素生成和彈性蛋白酶活性，并進(jìn)生物被膜形成；乳鐵蛋白與鐵結(jié)合后其殺菌性減弱，對綠膿菌素生成、彈性蛋白酶活性和生物被膜形成的抑制作用減弱。
　　 結(jié)論：

3、乳鐵蛋白對銅綠假單胞菌具有殺菌活性，能抑制毒力因子的表達(dá)，其作用受鐵離子的影響，可能部分地與其鐵螯合能力有關(guān)。
　　 第二部分：鐵螯合劑對銅綠假單胞菌生長和毒力因子表達(dá)的調(diào)節(jié)及其機(jī)制
　　 目的：研究鐵螯合劑8-羥基喹啉、甲磺酸去鐵胺對銅綠假單胞菌的殺菌性以及毒力因子表達(dá)和生物被膜形成的影響。
　　 方法：分別將8-羥基喹啉溶液、甲磺酸去鐵胺溶液及各自與FeCl3混合溶液分別加入到銅綠假單胞菌培養(yǎng)基（OD600=

4、0.05）中，以倍比稀釋平板培養(yǎng)法檢測活菌數(shù)評價其殺菌活性；以氯仿、鹽酸萃取法定量檢測綠膿菌素；以剛果紅彈性蛋白檢測彈性蛋白酶活性；結(jié)晶紫法定量檢測生物被膜；以結(jié)晶紫染色法，在光鏡下觀察生物被膜形態(tài)。RT-PCR法檢測相關(guān)基因mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：8-羥基喹啉、甲磺酸去鐵胺均表現(xiàn)為抑制細(xì)菌生長、綠膿菌素合成、彈性蛋白酶活性和生物被膜形成，同時促進(jìn)熒光素的表達(dá)；8-羥基喹啉螯合鐵后對細(xì)菌生長、綠膿菌素合成、彈性蛋白酶活性和

5、生物被膜形成的抑制作用增強(qiáng)，而甲磺酸去鐵胺則反而促進(jìn)細(xì)菌生長、綠膿菌素合成、彈性蛋白酶活性和生物被膜形成。
　　 結(jié)論：鐵螯合劑對銅綠假單胞菌的作用與其和鐵的螯合能力和結(jié)構(gòu)有關(guān)。鐵飽和8-羥基喹啉可能通過新的機(jī)制對銅綠假單胞菌發(fā)揮作用。
　　 第三部分：乳鐵蛋白源性多肽和乳鐵蛋白肽嵌合體對銅綠假單胞菌的作用
　　 目的：研究乳鐵蛋白源性多肽和乳鐵蛋白肽嵌合體對銅綠假單胞菌的殺菌性以及毒力因子表達(dá)和生物被膜形成的影

6、響。
　　 方法：分別將Lfcin溶液、Lfampin溶液、Lfchimera溶液及Lfcin與Lfampin混合溶液分別加入到銅綠假單胞菌培養(yǎng)基（OD600=0.05）中，以倍比稀釋平板培養(yǎng)法檢測活菌數(shù)評價其殺菌活性；以氯仿、鹽酸萃取法定量檢測綠膿菌素；以剛果紅彈性蛋白檢測彈性蛋白酶活性；結(jié)晶紫法定量檢測生物被膜；以結(jié)晶紫染色法，在光鏡和熒光顯微鏡下觀察生物被膜形態(tài)。
　　 結(jié)果：Lfcin、Lfampin、Lfchi