白藜蘆醇通過調(diào)節(jié)CUMS大鼠氧化應(yīng)激和mTOR通路發(fā)揮抗抑郁作用.pdf

1、研究背景:
　　抑郁癥作為當(dāng)今世界十大心理疾病之一，越來越嚴(yán)重地危及到人們的身心健康和正常生活，常見的抑郁癥癥狀還包括神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)，如自發(fā)性運動、睡眠及體重改變等。隨著社會競爭的日益壓力加劇，人們承受的生理、心理壓力越來越大，抑郁癥的發(fā)病率呈現(xiàn)不斷升高趨勢。因此加強(qiáng)對抑郁癥發(fā)病機(jī)制和防治的研究，具有十分重要的意義。
　　白藜蘆醇(resveratrol，Res)是一類從葡萄、藜蘆、虎杖等植物中提取的天然多酚類化合物，較易

2、透過血腦屏障進(jìn)入組織。Res具有強(qiáng)烈的抗炎、抗氧化、抗腫瘤、保護(hù)心腦血管等多種生物學(xué)活性。近年來，Res在神經(jīng)系統(tǒng)中的作用也引起越來越多的關(guān)注。研究表明，Res可通過調(diào)節(jié)腦內(nèi)5-羥色胺，去甲腎上腺素水平，激活單胺氧化酶-A和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain derived neurotrophic factor，BDNF)等因素來發(fā)揮抗抑郁作用。研究表明，在慢性不可預(yù)知溫和刺激模型(chronic unpredictable mild s

3、tress，CUMS)中，Res可以調(diào)節(jié)在海馬和杏仁核中血清皮質(zhì)酮的水平，上調(diào)BDNF的含量。海馬在學(xué)習(xí)和記憶中有發(fā)揮重要的作用，同時參與下丘腦-垂體-腎上腺的調(diào)節(jié)，而在抑郁癥中，海馬的上述兩項功能均發(fā)現(xiàn)明顯改變。另外，海馬，前額葉皮質(zhì)(prefrontal dorsolateral cortex，PFC)，杏仁核相互聯(lián)系，直接影響情緒、認(rèn)知，因此和抑郁癥的主要癥狀相關(guān)。但是在CUMS模型中Res如何通過逆轉(zhuǎn)CUMS大鼠海馬和PFC內(nèi)A

4、kt/mTOR的表達(dá)來發(fā)揮抗抑郁作用的機(jī)制尚不明確。
　　目的:
　　本課題我們擬選擇CUMS動物模型，研究Res如何改善大鼠的行為學(xué)特征，通過測量海馬和PFC中氧化應(yīng)激指標(biāo)和Akt/mTOR的磷酸化水平，闡明Res抗抑郁作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.分組將180-200克的雄性Wistar大鼠隨機(jī)分成正常(Control)組，正常+Res(Control+Res)組，模型(CUMS)組，模型+Res（CUMS

5、+Res組），模型+Ketamine(CUMS+Keta)組。
　　2.造模方法 Control組和Control+Res組不給予任何刺激，正常飼養(yǎng)。CUMS組，CUMS+Res組和CUMS+Keta組每周隨機(jī)給予7種刺激（分別是禁食24小時，禁水24小時，噪音3小時，45°傾斜籠子7小時，打濕籠子24小時，在4℃水中強(qiáng)迫游泳5分鐘），連續(xù)刺激4周。
　　3.干預(yù)方法 Control組，刺激前30分鐘腹腔注射生理鹽水。Con

6、trol+Res組，刺激前30分鐘腹腔注射Res(80mg/kg)。CUMS組，刺激前30分鐘腹腔注射生理鹽水。CUMS+Res組，刺激前30分鐘腹腔注射Res(80mg/kg)。CUMS+Keta組，造模前30分鐘腹腔注射生理鹽水，在最后一天，行為學(xué)實驗60分鐘之前，對該組的大鼠腹腔注射Keta(20mg/kg)。
　　4.檢測指標(biāo)及方法
　　4.1.連續(xù)4周刺激完成后，首先對各組大鼠進(jìn)行曠場試驗(open field t

7、est，OFT)，檢測動物探究行為及情緒反應(yīng)。
　　4.2.OFT完成后，對各組大鼠進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實驗(forced swimming test，F(xiàn)ST)，檢測大鼠的行為絕望和無助狀態(tài)。
　　4.3.FST完成后各組大鼠進(jìn)行糖水消耗試驗(sugar preference test，SPT)，檢測大鼠興趣缺失的狀態(tài)。
　　4.4.利用試劑盒檢測大鼠海馬和PFC內(nèi)丙二醛(malondialdchydc，MDA)和超氧化物歧化

8、酶(superoxide dismutase，SOD)的水平。4.5利用Western blot法檢測大鼠海馬和PFC內(nèi)，Akt和mTOR的磷酸化水平。
　　結(jié)果:
　　1.行為學(xué)變化
　　1.1.在SPT中，Control組和Control+Res組糖水偏好率沒有顯著差異;與Control組比較，CUMS組大鼠糖水偏好率顯著減少(p＜0.01);與CUMS組比較，CUMS+Res組(p＜0.05)和CUMS+Keta

9、組(p＜0.01)糖水偏好率明顯增加。
　　1.2.在FST中，Control組和Control+Res組游泳不動時間沒有顯著差異;與Control組比較，CUMS組大鼠游泳不動時間顯著增加(p＜0.001);與CUMS組比較，CUMS+Res組(p＜0.01)和CUMS+Keta組(p＜0.001)游泳不動時間明顯減少。13在OFT中，Control組和Control+Res組水平運動得分，垂直運動得分，自我修飾得分沒有顯著差異

10、;與Control組比較，CUMS組大水平運動得分(p＜0.05)和自我修飾得分(p＜0.05)都大幅度下降，而垂直運動得分差異性沒有統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.01);與CUMS組比較，CUMS+Res組水平運動得分(p＜0.05)和自我修飾得分明顯增加(p＜0.05)，而垂直運動得分差異性沒有統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)，CUMS+Keta組水平運動得分(p＜0.01)和自我修飾得分明顯增加(p＜0.05)，而垂直運動得分差異性沒有統(tǒng)計學(xué)意義

11、(p＞0.05)。
　　2.海馬和PFC中MDA含量2.1海馬MDA含量Control組和Control+Res組之間比較，海馬內(nèi)MDA含量無顯著差異(p＞0.05);與Control組比較，CUMS組海馬內(nèi)MDA含量均顯著增加(p＜0.001);與CUMS組比較，CUMS+Res組(p＜0.001)和CUMS+Keta組(p＜0.001)海馬內(nèi)MDA含量明顯降低。
　　PFC內(nèi)MDA含量Control組和Control+R

12、es組之間比較，PFC內(nèi)MDA含量無顯著差異(p＞0.05);與Control組比較，CUMS組PFC內(nèi)MDA含量均顯著增加，(p＜0.001);與CUMS組比較，CUMS+Res組(p＜0.001)和CUMS+Keta組(p＜0.001)PFC內(nèi)MDA含量明顯降低。
　　3.海馬和PFC內(nèi)SOD含量
　　3.1.海馬內(nèi)SOD含量Control組和Control+Res組之間比較，海馬內(nèi)SOD含量無顯著差異(p＞0.05);

13、與Control組比較，CUMS組PFC內(nèi)SOD含量均顯著降低，(p＜0.001);與CUMS組比較，CUMS+Res組(p＜0.05)和CUMS+Keta組(p＜0.01)海馬內(nèi)SOD含量明顯增加。
　　3.2.PFC內(nèi)SOD含量Control組和Control+Res組之間比較，PFC內(nèi)SOD含量無顯著差異(p＞0.05);與Control組比較，CUMS組PFC內(nèi)SOD含量均顯著降低(p＜0.01);與CUMS組比較，CUM

14、S+Res組(p＜0.05)和CUMS+Keta組(p＜0.01) PFC內(nèi)SOD含量明顯增加。
　　4.海馬和PFC內(nèi)mTOR、p-mTOR含量
　　4.1.海馬內(nèi)mTOR含量不同組別之間沒有明顯差異(p＞0.05);Control組和Control+Res組之間比較，海馬內(nèi)p-mTOR含量無顯著差異(p＞0.05);與Control組比較，CUMS組海馬內(nèi)p-mTOR含量均顯著減少(p＜0.05);與CUMS組比較，CU

15、MS+Res組(p＜0.05)和CUMS+Keta組(p＜0.05)海馬內(nèi)p-mTOR含量明顯增加。
　　4.2.PFC內(nèi)mTOR含量不同組別之間沒有明顯差異(p＞0.05);Control組和Control+Res組之間比較，PFC內(nèi)p-mTOR含量無顯著差異(p＞0.05);與Control組比較，CUMS組PFC內(nèi)p-mTOR含量均顯著減少(p＜0.05);與CUMS組比較，CUMS+Res組(p＜0.05)和CUMS+Ke

16、ta組(p＜0.01)PFC內(nèi)p-mTOR含量明顯增加。
　　5.海馬和PFC內(nèi)Akt、p-Akt含量
　　5.1.海馬內(nèi)Akt含量不同組別之間沒有明顯差異(p＞0.05);Control組和Control+Res組之間比較，海馬內(nèi)p-Akt含量無顯著差異(p＞0.05);與Control組比較，CUMS組海馬內(nèi)p-Akt含量均顯著減少(p＜0.01);與CUMS組比較，CUMS+Res組(p＜0.05)和CUMS+Keta

17、組(p＜0.05)海馬內(nèi)p-Akt含量明顯增加。
　　5.2.PFC內(nèi)Akt含量不同組別之間沒有明顯差異(p＞0.05);Control組和Control+Res組之間比較，PFC內(nèi)p-Akt含量無顯著差異(p＞0.05);與Control組比較，CUMS組PFC內(nèi)p-Akt含量均顯著減少(p＜0.05);與CUMS組比較，CUMS+Res組(p＜0.05)和CUMS+Keta組(p＜0.05) PFC內(nèi)p-Akt含量明顯增加。<

18、br>　　結(jié)論:
　　1.在SPT中，CUMS使大鼠出現(xiàn)快感缺失的抑郁癥狀，糖水偏好率減少;在FST中，CUMS使大鼠出現(xiàn)行為絕望狀態(tài)，游泳不動時間增加;在OFT中，CUMS使大鼠出現(xiàn)精神運動遲緩的癥狀，對自身關(guān)注度下降，水平運動得分和自我修飾得分都大幅度下降。Res能改善CUMS大鼠精神運動遲緩的癥狀，提高了對自身的關(guān)注度，通過自我理毛緩解在新異環(huán)境中的緊張和沖動。提示Res能有效改善CUMS抑郁大鼠行為學(xué)變化。
　　2.