白藜蘆醇通過Notch1信號通路對Molt-4細(xì)胞作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:通過細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，觀察白藜蘆醇(Res)對人類急性T淋巴細(xì)胞白血病(T-ALL) Molt-4細(xì)胞株增殖與凋亡的影響，并進(jìn)一步探討其發(fā)揮抗T-ALL作用的Notch1機(jī)制，為Res抗T-ALL的臨床應(yīng)用作用提供更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。觀察Res與γ分泌酶抑制劑類藥物DAPT的聯(lián)合作用對Molt-4細(xì)胞增殖與凋亡的影響，探討聯(lián)合用藥，發(fā)揮其協(xié)同作用的臨床價值。
　　方法:
　　1.以人T-ALL Molt-4細(xì)胞為研究對象，MT

2、T法檢測不同濃度Res(50、75、100、125μmol/L)處理Molt-4細(xì)胞24h、48、72h后，各組Molt-4細(xì)胞的增殖抑制率。
　　2.流式細(xì)胞儀檢測不同濃度Res（50、75、100、125μmol/L）處理Molt-4細(xì)胞24h后，對照組及各實(shí)驗(yàn)組Molt-4細(xì)胞的凋亡率。
　　3.RT-PCR法檢測不同濃度Res(50、75、100μmol/L)處理Molt-4細(xì)胞24h后，對照組及各實(shí)驗(yàn)組Notch1

3、、Hes-1基因的相對表達(dá)情況。
　　4.MTT法檢測DAPT組（10μmol/L）以及不同濃度Res(50、75、100、125μmol/L)聯(lián)合DAPT（10μmol/L）處理Molt-4細(xì)胞24h、48、72h后，各組Molt-4細(xì)胞的增殖抑制率。
　　5.流式細(xì)胞儀檢測DAPT(10μmol/L)以及不同濃度Res(50、75、100、125μmol/L)聯(lián)合DAPT(10μmol/L)處理Molt-4細(xì)胞24h后，

4、對照組及各實(shí)驗(yàn)組Molt-4細(xì)胞的凋亡率。
　　結(jié)果:
　　1.不同濃度Res作用于Molt-4細(xì)胞24、48、72h后，均可抑制Molt-4細(xì)胞的增殖。各濃度Res處理Molt-4細(xì)胞24、48、72h后，各組Molt-4細(xì)胞的增殖抑制率分別如下:50μmol/L依次為30.22％、53.94％、67.10％;75μmol/L依次為32.75％、62.43％、79.12％;100μmol/L依次為39.11％、71.98％

5、、84.10％;125μmol/L依次為52.38％、75.07％、89.84％。各組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在一定時間內(nèi)，隨Res濃度的增加，Res對Molt-4細(xì)胞的增殖抑制作用逐漸增強(qiáng);在相同Res濃度下，隨Res作用時間的延長，Res對Molt-4細(xì)胞的增殖抑制作用逐漸增強(qiáng)。Res對Molt-4細(xì)胞的增殖抑制作用呈現(xiàn)出顯著地時間-劑量依賴特性。
　　2.與對照組相比，各濃度Res作用于Molt-4細(xì)胞24h

6、后，對Molt-4細(xì)胞均表現(xiàn)出誘導(dǎo)凋亡作用。對照組凋亡比例為（8.23±1.03）％，此凋亡率為Molt-4細(xì)胞生長過程中的正常凋亡率;50、75、100、125μmol/LRes作用于Molt-4細(xì)胞24h后，細(xì)胞凋亡比例分別為（17.60±1.68）％、（25.07±0.68）％、（43.30±2.11）％、（56.87±1.60）％。各組與對照組之間，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。各實(shí)驗(yàn)組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05

7、)。Res對Molt-4細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡能力具有濃度依賴性。
　　3.設(shè)對照組Notch1基因相對表達(dá)量為1，50、75、100μmol/LRes作用于Molt-4細(xì)胞24h后，各實(shí)驗(yàn)組Molt-4細(xì)胞Notch1基因相對表達(dá)量分別為0.81±0.01、0.72±0.02、0.49±0.01，各組與對照組之間，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。各實(shí)驗(yàn)組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。設(shè)對照組Hes-1基因相對表達(dá)量為1，5

8、0、75、100μmol/LRes作用于Molt-4細(xì)胞24h后，各實(shí)驗(yàn)組Molt-4細(xì)胞Hes-1基因相對表達(dá)量分別為0.33±0.01、0.30±0.01、0.26±0.01，各組與對照組之間，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。各實(shí)驗(yàn)組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Res作用后，明顯下調(diào)Molt-4細(xì)胞Notch1、Hes-1基因的表達(dá)，該下調(diào)作用呈濃度依賴性。
　　4.10μmol/L DAPT作用于Mo1t-4

9、細(xì)胞24h、48、72h后，對Molt-4細(xì)胞均表現(xiàn)出不同程度的增殖抑制作用。24、48、72h增殖抑制率分別為19.53％、25.03％、30.89％，各實(shí)驗(yàn)組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Res(50、75、100、125μmol/L)聯(lián)合DAPT(10μmol/L)作用于Molt-4細(xì)胞24、48、72h后，對Molt-4細(xì)胞均表現(xiàn)出不同程度的增殖抑制作用。Res(50μmol/L)+ DAPT（10μmol/L）組24

10、、48、72h增殖抑制率分別為:55.95％、69.20％、79.55％; Res(75μmol/L)+DAPT(10μmol/L)組24、48、72h增殖抑制率分別為:62.77％、80.03％、86.45％;Res(100μmol/L)+ DAPT(10μmol/L)組24、48、72h增殖抑制率分別為:69.94％、85.12％、91.18％; Res(125μmol/L)+DAPT（10μmol/L）組24、48、72h增殖抑制

11、率分別為:89.77％、93.28％、96.51％。各實(shí)驗(yàn)組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Res聯(lián)合DAPT作用后，增殖抑制作用明顯增強(qiáng)，表現(xiàn)出明顯的協(xié)同作用。
　　5.10μmol/L DAPT作用于Molt-4細(xì)胞24h后，對Molt-4細(xì)胞表現(xiàn)出誘導(dǎo)凋亡作用。對照組凋亡比例為（8.23±1.03）％，此凋亡為細(xì)胞正常凋亡率;10μmol/L DAPT作用于Molt-4細(xì)胞24h后，細(xì)胞凋亡率為(12.30±1.40

12、)％，兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Res(50、75、100、125μmol/L)聯(lián)合DAPT（10μmol/L）作用于Molt-4細(xì)胞24后，對Molt-4細(xì)胞均表現(xiàn)出誘導(dǎo)凋亡作用。各聯(lián)合組細(xì)胞凋亡比例依次為(30.37±1，20)％、(35.13±1.42)％、（65.27±1.9）％、（78.5±2.43）％。各組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Res聯(lián)合DAPT作用后，對Molt-4細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用明顯