7，8-二羥基黃酮誘導(dǎo)AMPA GluA1的突觸表達(dá)矯正脆性X綜合征模型小鼠樹突棘異常并改善認(rèn)知功能.pdf

1、目的：脆性Ⅹ綜合征(FragileⅩ syndrome，F(xiàn)ⅩS)是最常見的遺傳性智力障礙疾病，其特征性病理改變是腦神經(jīng)元上大量未成熟的樹突棘，但是缺乏有效的藥物治療。7，8-二羥基黃酮(7，8-Dihydroxyflavone，7，8-DHF)是最近發(fā)現(xiàn)的首個腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的小分子模擬物，可以特異性激活BDNF的高親和力受體酪氨酸激酶B（TrkB）。本文重點(diǎn)研究7，8-DHF對FⅩS動物模型Fmr1基因敲除小鼠(Fmr1

2、 KO)的認(rèn)知功能和樹突棘異常的改善作用，并深入分析了TrkB下游信號分子和突觸功能相關(guān)蛋白激活情況，以期為治療FⅩS提供新的候選藥物。
　　方法：將64只雄性1月齡Fmr1 KO(FVB129 P2-Pde6b+Tyrc-ch-Fmr1 tml Cgr/J)和同齡野生型(WT)小鼠（FVB.129P2-Pde6bTyrc-ch/AntJ）隨機(jī)分入治療組(7，8-DHF-KO;7，8-DHF-WT)和溶媒對照組(vehicle-K

3、O; vehicle-WT)，每組16只，治療組通過飲用水喂養(yǎng)7，8-DHF(5 mg/kg)，溶媒組喂養(yǎng)不含7，8-DHF同濃度二甲基亞砜溶媒劑。四周后觀察小鼠行為學(xué)變化，確定7，8-DHF對Fmr1 KO小鼠恐懼記憶和空間記憶功能的影響;用高爾基染色法檢測7，8-DHF對小鼠海馬和杏仁核腦區(qū)神經(jīng)元樹突棘異常的矯正作用;再用Western blot檢測小鼠TrkB及其下游信號通路鈣離子/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和鈣-磷脂

4、依賴性蛋白激酶C(PKC)等分子的表達(dá)水平和磷酸化水平，以及調(diào)控樹突棘成熟和突觸可塑性的離子型谷氨酸受體α-氨基-3-羥基-5-甲基-異惡唑丙酸受體(AMPAR)GluA1-4亞基在突觸表面的表達(dá)情況，并探索其突觸改變與TrkB下游信號激活的關(guān)系。
　　結(jié)果：⑴7，8-DHF治療4周后，明顯改善Fmr1 KO小鼠的恐懼和空間學(xué)習(xí)記憶；⑵7，8-DHF增加Fmr1 KO小鼠海馬和杏仁核錐體神經(jīng)元成熟樹突棘數(shù)量，矯正其形態(tài)異常；⑶7，

5、8-DHF增加突觸AMPA受體GluA1亞基的表達(dá)，并減少GluA2亞基在突觸表面的表達(dá)；⑷7，8-DHF增加Fmr1 KO小鼠突觸GluA1亞基羧基端Ser818和Ser813位點(diǎn)的磷酸化，并因此將GluA1亞基表達(dá)到突觸表面，但是增加GluA2亞基羧基端Ser880位點(diǎn)的磷酸化，并因此增加GluA2亞基從突觸表面脫落，GluA1和GluA2在突觸表面表達(dá)的增減與TrkB及其信號通路下游的CaMKⅡ和PKC等的激活有關(guān)。
　　結(jié)