7,8-二羥基黃酮對缺氧誘導下腎小管上皮細胞內質網應激的抑制作用.pdf

1、目的：觀察7,8-二羥基黃酮（7,8-dihydroxyflavone，7,8-DHF）對缺氧誘導的人近端腎小管上皮細胞內質網應激（Endoplasmic reticulum stress，ERS）損傷的影響，并初步探討其可能的分子機制。
　　方法：體外培養(yǎng)人近端腎小管上皮細胞（HK-2），采用缺氧培養(yǎng)箱建立細胞缺氧損傷模型，排除含血清培養(yǎng)基對缺氧的影響后，實驗分為5組，分別為缺氧0h、4h、8 h、12 h、16 h組。實時熒光

2、定量PCR（RT-PCR）法篩選缺氧誘導ERS的最佳缺氧時間。用不同濃度（50、100、150、200、250μmol/L）7,8-DHF處理HK-2細胞,采用細胞增殖與活性實驗篩選7,8-DHF的安全濃度。用7,8-DHF預處理HK-2細胞缺氧模型，按如下處理因素分組：對照組、缺氧+DMSO組、缺氧+7,8-DHF組（包括100μmol/L組和150μmol/L組），通過檢測細胞增殖與活性篩選最佳給藥濃度。后將細胞隨機分為缺氧組、缺氧

3、+7,8-DHF組（100μmol/L），Western印跡法檢測細胞蛋白激酶（Akt）、磷酸化蛋白激酶（p-Akt）、富含半胱氨酸蛋白61（Cysteine-rich protein61，Cyr61）、ERS相關促凋亡蛋白CCAAT增強子結合蛋白（CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein，CHOP）的表達。用重組Cyr61慢病毒載體構建穩(wěn)定表達Cyr61蛋白的Cyr61-HK-

4、2細胞株進行缺氧實驗，按如下處理因素分組：缺氧+空質粒轉染組，缺氧+Cyr61過表達組，采用膜連蛋白V和碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）染色后采用流式細胞儀檢測細胞凋亡，Western印跡檢測Cyr61和CHOP蛋白的表達情況。
　　結果：（1）與正常培養(yǎng)組細胞相比，RT-PCR實驗結果顯示12 h為誘導ERS的最佳缺氧時間（P＜0.01）。（2）與對照組相比，細胞增殖與活性實驗結果顯示100μmol/L的7,8-D

5、HF組為最佳給藥濃度（P＜0.01）。（3）與缺氧+DMSO組相比，7,8-DHF預處理HK-2細胞，p-Akt、Cyr61表達量均明顯增高（P＜0.05），CHOP表達量明顯降低（P＜0.05）；LY294002處理可抑制p-Akt的表達，減少Cyr61及增加CHOP的表達（均 P＜0.05）。（4）與缺氧+空質粒轉染組相比，過表達 Cyr61組細胞的凋亡率明顯降低（P＜0.01）。（5）與缺氧+空質粒轉染組相比，過表達Cyr61組的