下調(diào)Smad4基因?qū)粑鼨C(jī)相關(guān)性肺損傷細(xì)胞外基質(zhì)重塑的影響.pdf

1、目的:
　　機(jī)械通氣(mechanicalventilation，MV)在呼吸危重癥患者的救治過程中起著至關(guān)重要的作用，呼吸機(jī)的不恰當(dāng)使用可引起或加重肺損傷，即呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷(ventilatorinducedlunginjury，VILI)。明確VILI的發(fā)生機(jī)制對(duì)于提高危重病患者的救治水平及生存率有著十分重要的臨床價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)通過建立VILI的動(dòng)物模型，探討TGF-β/Smad信號(hào)通路在VILI模型中對(duì)小鼠肺組織細(xì)胞外基質(zhì)

2、重塑的可能作用機(jī)制。
　　方法:
　　將24只6-8周齡的C57BL/6小鼠隨機(jī)分為四組，即正常對(duì)照組（Ⅰ組）、單純機(jī)械通氣組（Ⅱ組）、病毒陰性對(duì)照加機(jī)械通氣組（Ⅲ組）和Smad4siRNA病毒加機(jī)械通氣組（Ⅳ組），每組6只。實(shí)驗(yàn)過程中，將小鼠充分麻醉，通過病毒滴鼻的方法使小鼠肺部分別感染Smad4siRNA病毒及陰性對(duì)照病毒從而建立慢病毒模型;4周后，對(duì)機(jī)械通氣組小鼠進(jìn)行大潮氣量機(jī)械通氣(VT=40mL/kg)建立呼吸機(jī)相

3、關(guān)性肺損傷模型。將小鼠充分麻醉，暴露頸部皮膚，常規(guī)酒精消毒行氣管切開，插管固定好后，連接小動(dòng)物呼吸機(jī)以行機(jī)械通氣，其中潮氣量設(shè)置為40mL/kg，通氣時(shí)間設(shè)置為4h。通氣結(jié)束后72h將小鼠充分麻醉，固定小鼠四肢，充分暴露胸腹部，剖開小鼠胸腹腔，剪斷腹主動(dòng)脈，待其流血至死，生理鹽水充分灌洗后取出左右雙肺。RealTime-PCR和Westernblot法分別檢測(cè)Smad4mRNA與蛋白的表達(dá)檢驗(yàn)慢病毒是否成功感染小鼠肺部組織。制作石蠟切片

4、后行蘇木素-伊紅(Haematoxylin-eosine，HE)染色觀察小鼠肺組織病理學(xué)變化，評(píng)價(jià)肺損傷的嚴(yán)重程度，Masson染色觀察比較各組小鼠肺組織膠原纖維的沉積量，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)α-SMA表達(dá)，RealTime-PCR和Westernblot法分別檢測(cè)肺組織中o-SMA、膠原Ⅰ、膠原ⅢmRNA與蛋白的表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　Smad4siRNA加機(jī)械通氣組（Ⅳ組）中肺組織的Smad4mRNA和蛋白的表達(dá)量明顯

5、低于單純機(jī)械通氣組（Ⅱ組）與病毒陰性對(duì)照加機(jī)械通氣組（Ⅲ組）(P＜0.05)，證明Smad4慢病毒成功感染至小鼠肺組織。單純機(jī)械通氣組（Ⅱ組）與病毒陰性對(duì)照加機(jī)械通氣組（Ⅲ組）其炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及膠原纖維的沉積較正常組嚴(yán)重，Smad4siRNA加機(jī)械通氣組(Ⅳ組)中卻有明顯改善（P＜0.05）。單純機(jī)械通氣組（Ⅱ組）與病毒陰性對(duì)照加機(jī)械通氣組（Ⅲ組）α-SMA、膠原Ⅰ、膠原ⅢmRNA與蛋白的表達(dá)明顯高于正常組（P＜0.05），Ⅳ組較之有所減

6、少(P＜0.05)。單純機(jī)械通氣組（Ⅱ組）與病毒陰性對(duì)照加機(jī)械通氣組(Ⅲ組)之間，無論是炎性細(xì)胞浸潤(rùn)與膠原沉積，還是Smad4、α-SMA、膠原Ⅰ、膠原ⅢmRNA與蛋白的表達(dá)量差異都沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，說明陰性對(duì)照病毒可能對(duì)小鼠肺組織基因的表達(dá)無影響。
　　結(jié)論:
　　大潮氣量機(jī)械通氣會(huì)造成呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷(VILI)，損傷后的肺部組織表現(xiàn)為大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、膠原纖維沉積及細(xì)胞外基質(zhì)重塑。此過程可能與TG