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文檔簡介
1、目的:研究IL-22抑制肝星狀細胞致肝纖維化的作用和機制,探索Wnt/β-catenin通路在肝星狀細胞激活過程中的作用,進一步明確IL-22是否經(jīng)抑制Wnt/β-catenin通路發(fā)揮抗肝纖維化的作用。
方法:采用TGF-β1激活肝星狀細胞,分別使用0、2.5 ng/mL、5 ng/mL濃度的TGF-β1干預肝星狀細胞48 h,熒光定量PCR和Western-blot檢測干預后細胞內β-catenin和α-SMAmRNA和蛋
2、白水平變化。分別使用0、250pg/mL、500 pg/mL、750 pg/mL、1000 pg/mL濃度IL-22干預肝星狀細胞48h后,CCK8法檢測細胞的增殖情況。再以1000 pg/mL濃度IL-22分別干預肝星狀細胞12h、24 h、36 h、48 h,CCK8法以及流式細胞術檢測細胞的增殖和凋亡情況。以1000 pg/mL濃度IL-22干預肝星狀細胞48h后,檢測干預后肝星狀細胞增殖率;再采用5 ng/mL濃度的TGF-β1
3、預處理肝星狀細胞24h,然后給予1000 pg/mL濃度的IL-22干預肝星狀細胞48 h,再次檢測細胞增殖率,對比激活肝星狀細胞前后細胞增殖率被IL-22抑制情況。以1000 pg/mL濃度IL-22干預肝星狀細胞48h后,檢測細胞內的β-catenin、α-SMA mRNA和蛋白表達水平;再采用5 ng/mL濃度的TGF-β1預處理肝星狀細胞24h,然后給予1000 pg/mL濃度的IL-22干預肝星狀細胞48 h,再次檢測細胞內的
4、β-catenin、α-SMAmRNA和蛋白表達水平。對比干預前后肝星狀細胞β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表達變化情況。
結果:TGF-β1激活肝星狀細胞后結果顯示β-catenin和α-SMA mRNA和蛋白水平均隨著TGF-β1濃度增加而升高(P<0.05),提示肝星狀細胞激活過程中伴隨著Wnt/β-catenin通路激活和α-SMA表達改變。不同濃度IL-22干預后顯示肝星狀細胞增殖率隨著IL-22濃度增
5、加呈下降趨勢,到750pg/mL時的細胞增殖率顯著大于0 pg/mL(P<0.05);再以同一濃度IL-22分別干預肝星狀細胞不同時間,結果顯示肝星狀細胞增殖率隨IL-22干預時間增加呈下降趨勢,在干預后48h最顯著(P<0.05),肝星狀細胞凋亡率隨著IL-22濃度增加呈升高趨勢,但各個濃度組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),且IL-22干預的各時間段之間細胞凋亡率差異亦無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。對比IL-22干預肝星狀細胞前后
6、,干預后肝星狀細胞增殖率顯著下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);對比IL-22干預TGF-β1激活前后的肝星狀細胞細胞增殖率,結果顯示IL-22對激活后細胞增殖率抑制更顯著(P<0.05)。對比IL-22干預TGF-β1激活前后的肝星狀細胞細胞β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表達水平,結果顯示IL-22對激活后肝星狀細胞細胞β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表達的抑制作用更顯著(P<0.05)。
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