Wnt-β-catenin通路對(duì)麥芽酚鋁致PC-12細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、[目的]：利用麥芽酚鋁(Al(mal)3)對(duì)PC-12細(xì)胞進(jìn)行染毒，從蛋白和基因的角度探討鋁對(duì)Wnt/β-catenin通路的影響，進(jìn)而探討麥芽酚鋁通過(guò)Wnt/β-catenin通路致神經(jīng)元凋亡的機(jī)制。
　　 [方法]：1.PC-12細(xì)胞培養(yǎng)，分為兩部分：1）第一部分設(shè)4個(gè)組，以Al(mal)3對(duì)細(xì)胞染毒，分為空白對(duì)照、100μmol/LAl(mal)3染毒組、200μmol/LAl(mal)3染毒組、400μmol/LAl(m

2、al)3染毒組，染毒48小時(shí)；2）第二部分設(shè)5個(gè)組，分為空白對(duì)照組、DMSO對(duì)照組、單純激動(dòng)劑組、200μmol/LAl(mal)3染毒組、DMSO+200μmol/LAl(mal)3組和激動(dòng)劑+200μmol/LAl(mal)3組，處理48小時(shí)。
　　 21各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)：1）CCK-8法和流式細(xì)胞術(shù)AnnexinVFITC-PI染色分別檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞活力及凋亡率；2）QRT-PCR、和Elisa法檢測(cè)PC-12細(xì)胞Wnt3a、D

3、ishelleved、β-catenin、GSK-3β、BCL-2/BAX、caspase-3mRNA及蛋白的表達(dá)。
　　 [結(jié)果]：1.細(xì)胞活力結(jié)果：1）第一部分細(xì)胞：48小時(shí)染毒后PC-12細(xì)胞活力隨著Al(mal)3濃度的增加逐漸降低；與空白對(duì)照組比較，低、中、高劑量組細(xì)胞活力均明顯降低(P＜0.05)。2)第一部分細(xì)胞：空白對(duì)照組、DMSO對(duì)照組和單純激動(dòng)劑組的細(xì)胞在處理后培養(yǎng)48小時(shí)，其細(xì)胞活力沒(méi)有明顯差別；與空白對(duì)照

4、組相比，200μMAl(mal)3染毒組、DMSO+200μMAl(mal)3組以及激動(dòng)劑+200μMAl(mal)3組細(xì)胞活力明顯下降(P＜0.05)；其中激動(dòng)劑+200Al(mal)3組相比200μMAl(mal)3染毒組，其活力又有明顯升高(P＜0.05)。
　　 2.凋亡率結(jié)果：1）第一部分細(xì)胞：48小時(shí)染毒后PC-12細(xì)胞凋亡率隨著Al(mal)3染毒濃度的增加逐漸上升，與空白對(duì)照組相比，三個(gè)染毒組細(xì)胞的凋亡率均明顯增

5、加(P＜0.01)；2)第二部分細(xì)胞：①與空白對(duì)照組相比，DMSO對(duì)照組和單純激動(dòng)劑組以及激動(dòng)劑+200μMAl(mal)3組的細(xì)胞的凋亡率無(wú)明顯變化，而200μMAl(mal)3組和DMSO+200μMAl(mal)3組的細(xì)胞凋亡率均明顯增加(P＜0.05)；②與200μMAl(mal)3組相比，激動(dòng)劑+200μMAl(mal)3組的細(xì)胞的凋亡率明顯減少(P＜0.05)，而DMSO+200μMAl(mal)3組凋亡率無(wú)明顯變化。

6、>　　 3.熒光定量PCR結(jié)果：1）第一部分細(xì)胞：①隨著染毒劑量的升高，BAX、caspase-3基因含量呈升高趨勢(shì)，BCL-2基因含量呈下降趨勢(shì)，與空白對(duì)照組相比，中、高劑量組BAX、caspase-3基因含量明顯增加(p＜0.05)，BCL-2基因含量明顯降低(p＜0.05)；②隨著染毒劑量的增加，GSK-3β基因含量呈升高趨勢(shì)，Wnt-3a、Dishevelled、β-catenin基因含量呈下降趨勢(shì)，；與空白對(duì)照組組相比,40

7、0μMAl(mal)3組GSK-3β基因含量明顯增加(p＜0.05)；Wnt-3a、Dishevelled、β-catenin基因含量明顯降低(p＜0.05)，200μMAl(mal)3組的Dishevelled基因含量也明顯降低(p＜0.05)。2)第二部分細(xì)胞：①與空白對(duì)照組相比，單純激動(dòng)劑組、DMSO對(duì)照組BCL-2、BAX、caspase-3基因的表達(dá)量均無(wú)明顯變化，激動(dòng)劑+200μMAl(mal)3組BCL-2、caspase

8、-3基因表達(dá)量無(wú)明顯變化，BAX基因表達(dá)量有明顯升高(p＜0.05)，200μMAl(mal)3組和DMSO+200μMAl(mal)3組，BAX、caspase-3基因的表達(dá)明顯升高(p＜0.05)，而B(niǎo)CL-2的表達(dá)明顯下降(p＜0.05)；②與200μMAl(mal)3組相比，激動(dòng)劑+200μMAl(mal)3組BAX、caspase-3基因表達(dá)量明顯降低、BCL-2基因明顯升高(p＜0.05)，而DMSO+200μMAl(mal

9、)3組各基因均無(wú)明顯變化。
　　 4.ELISA結(jié)果：1）第一部分細(xì)胞：BAX、caspase-3蛋白的表達(dá)隨著染毒劑量的增加呈升高趨勢(shì)，BCL-2的表達(dá)隨著染毒劑量的升高呈下降趨勢(shì)，與空白對(duì)照組相比，中、高劑量組BAX、caspase-3蛋白的表達(dá)量明顯增加(p＜0.05)，BCL-2蛋白表達(dá)量明顯降低(p＜0.01)；2)第二部分細(xì)胞：①與空白對(duì)照組相比，單純激動(dòng)劑組、DMSO對(duì)照組BCL-2、BAX、caspase-3蛋白

10、的表達(dá)量均無(wú)明顯變化，激動(dòng)劑+200μMAl(mal)3組BAX、caspase-3蛋白表達(dá)量無(wú)明顯變化，BCL-2蛋白表達(dá)量有明顯降低(p＜0.05)，200μMAl(mal)3組和DMSO+200μMAl(mal)3組，BAX、caspase-3蛋白的表達(dá)明顯升高(p＜0.05)，而B(niǎo)CL-2的表達(dá)明顯下降(p＜0.05)；②.與200μMAl(mal)3組相比，激動(dòng)劑+200μMAl(mal)3組BAX、caspase-3蛋白表達(dá)