淫羊藿苷對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠Wnt-β-Catenin信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的:觀察不同濃度的淫羊藿苷(ICA)對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松(OP)大鼠的治療作用,并在此基礎(chǔ)上研究ICA對(duì)OP大鼠骨組織Wnt/β-Catenin信號(hào)通路的影響,以期闡明ICA保護(hù)骨量、治療OP的生物學(xué)機(jī)制,為開(kāi)發(fā)傳統(tǒng)中藥治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松(POP)提供生物學(xué)理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.POP模型的制備:運(yùn)用雙側(cè)卵巢切除法復(fù)制POP模型。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組:將86只SD大鼠隨機(jī)分為空白組(16只)和模型組(70只)。待

2、造模成功后,根據(jù)是否給予ICA,將模型組隨機(jī)分為模型對(duì)照組(OVX組)、陽(yáng)性對(duì)照組(Positive組)、ICA低劑量組(ICA-L組)、ICA中劑量組(ICA-M組)、ICA高劑量組(ICA-H組),每組14只。
　　3.骨密度(BMD)的檢測(cè):分別于造模12w后和藥物干預(yù)12w后,采用雙能X線吸收法(DXA)檢測(cè)各組大鼠腰椎、股骨的BMD。
　　4.血清各指標(biāo)的檢測(cè):采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中血清鈣(Ca2+)、磷(

3、P3+)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酐(BUM)、尿素(Cr)、谷氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)的含量;運(yùn)用ELISA法檢測(cè)血清中骨保護(hù)素(OPG)、骨鈣素(BGP)的含量。
　　5.生物力學(xué)的檢測(cè):采用三點(diǎn)彎曲試驗(yàn)檢測(cè)股骨的最大彎曲載荷;采用壓縮試驗(yàn)檢測(cè)腰椎的最大壓縮載荷。
　　6.骨組織形態(tài)學(xué)觀察:將大鼠股骨、腰椎放入Micro-CT儀進(jìn)行掃描,觀察骨小梁分離度(Tb.Sp),骨小梁厚度(Tb.Th),骨小

4、梁數(shù)量(Tb.N)的變化。
　　7.股骨的病理學(xué)觀察:將大鼠股骨進(jìn)行HE染色,觀察各組大鼠股骨的病理學(xué)的變化。
　　8.Wnt/β-Catenin信號(hào)通路中β-Catenin蛋白的表達(dá):采用Western-blot法檢測(cè)大鼠脛骨中β-Catenin蛋白的表達(dá)。
　　9.Wnt/β-Catenin信號(hào)通路中Lrp6、GSK-3β、β-Catenin、Runx2 mRNA的表達(dá):采用QPCR檢測(cè)股骨中β-Catenin、G

5、SK-3β、Lrp6、Runx2 mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.造模復(fù)制12w后,OVX組BMD顯著性減低(P<0.05),說(shuō)明造模成功。
　　2.藥物干預(yù)12w后,與Sham組比較,OVX組BMD和骨強(qiáng)度降低,血清中Ca2+、P3+含量顯著下降,Tb.N和Tb.Th減少(P<0.05),而ALP、BGP含量和Tb.Sp增加(P<0.05);而給以相應(yīng)的藥物后,Positive組、ICA-L組、ICA-M組、I

6、CA-H組BMD、骨強(qiáng)度、Tb.N和Tb.Th和骨礦鹽含量均顯著上升(P<0.05),同時(shí)Tb.Sp降低(P<0.05),其中ICA-M組最為明顯,趨于Positive組。
　　3.Western-blot結(jié)果顯示,與Sham組比較,OVX組中β-Catenin蛋白含量顯著減低(P<0.05);與OVX組比較,ICA-M組中β-Catenin蛋白顯著性增加(P<0.05)。
　　4.QPCR結(jié)果顯示,與Sham組比較,OVX

7、組中β-Catenin、Lrp6、Runx2 mRNA顯著降低(P<0.05),而GSK-3β mRNA顯著增加(P<0.05);與OVX組比較,ICA-M組β-Catenin、Lrp6、Runx2 mRNA表達(dá)顯著增加(P<0.05),而GSK-3βmRNA顯著減低(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.大鼠雙側(cè)卵巢去除后,其BMD、Tb.N、Tb.Th和骨強(qiáng)度以及骨礦鹽含量明顯降低,而骨小梁分離度明顯增加;用ICA進(jìn)行干

8、預(yù)后,能顯著扭轉(zhuǎn)上述癥狀,即能有效增加4、5腰椎和股骨的BMD,增加骨組織骨小梁數(shù)量、骨小梁厚度,增加骨強(qiáng)度和骨礦鹽含量,降低骨小梁分離度,說(shuō)明ICA對(duì)去卵巢OP大鼠具有較好的抗OP的功效。
　　2.其中ICA-M組抗OP的作用尤為明顯,因此,我們采用該劑量組的大鼠進(jìn)行機(jī)制學(xué)研究。研究發(fā)現(xiàn),ICA抗OP的作用可能是通過(guò)上調(diào)Wnt/β-Catenin信號(hào)通路中Lrp6受體mRNA,增加GSK-3β mRNA的磷酸化從而增加β-Cat