白念珠菌ERG4基因突變-高表達(dá)與唑類藥物耐藥的關(guān)系.pdf

1、背景：
　　人的皮膚、粘膜等部位有念珠菌存在，是一種常見條件致病性真菌，能導(dǎo)致皮膚、粘膜、內(nèi)臟器官感染以及念珠菌菌血癥等，對(duì)人類健康產(chǎn)生嚴(yán)重危害。近年來臨床上隨廣譜抗生素和糖皮質(zhì)激素的大量應(yīng)用，侵襲性治療、器官移植和免疫功能低下病患的增多，念珠菌感染呈逐年增加趨勢(shì)。目前，臨床上治療白念珠菌感染主要以唑類抗真菌藥物為主。由于臨床治療不規(guī)范等諸多因素影響，導(dǎo)致念珠菌耐藥性日益嚴(yán)重，臨床治療屢屢失敗。白念珠菌所致系統(tǒng)性感染的死亡率已高達(dá)

2、50％，成為臨床嚴(yán)重危害患者生命健康的主要疾病之一，因此研究白念珠菌的耐藥機(jī)制顯得尤為迫切。
　　目的：
　　探討臨床分離白念珠菌ERG4基因突變、高表達(dá)與唑類抗真菌藥物耐藥的關(guān)系。
　　方法：
　　收集2012年12月至2013年5月來自山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院皮膚性病科真菌實(shí)驗(yàn)室保存的白念珠菌臨床分離菌株34株，分別來自呼吸道分泌物19株、泌尿生殖道分泌物10株（均為性傳播疾病患者）、血液1株、甲屑1株、皮

3、膚鱗屑3株。標(biāo)準(zhǔn)菌株為白念珠菌ATCC11006，購(gòu)自北京大學(xué)真菌與真菌病研究中心。通過體外藥物敏感性試驗(yàn)獲得后續(xù)研究所需要的耐藥和敏感菌株，對(duì)白念珠菌臨床分離株的ERG4基因進(jìn)行克隆測(cè)序、生物信息學(xué)分析、尋找突變位點(diǎn)；再通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Erg4p的表達(dá)水平；探討ERG4基因突變、高表達(dá)對(duì)白念珠菌耐唑類抗真菌藥物的影響。
　　結(jié)果：
　?。?）34株臨床分離白念珠菌株對(duì)5-氟胞嘧啶（5-FC）均敏感；對(duì)兩性霉素B（

4、AMB）、氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）和伏立康唑（VRC）存在不同程度耐藥，耐藥菌株所占比例分別為2.94%、52.94%、70.59%和50.00%.，并存在交叉耐藥（44.12%）和多藥耐藥現(xiàn)象(2.94%)。
　　（2）34株白念珠菌臨床菌株中，共檢測(cè)出ERG4基因存在2個(gè)同義突變位點(diǎn)，C711T和C435T。
　?。?）白念珠菌耐FCA菌株組ERG4基因mRNA表達(dá)量（3.44±4.03）顯著高于敏感組的表達(dá)

5、量（1.48±1.51）（平均秩為22.61和11.75，P＜0.05）；白念珠菌耐ITR組ERG4基因mRNA表達(dá)量（2.46±3.88）顯著高于敏感組的表達(dá)量（1.25±2.27）（平均秩為20.13和11.20，P＜0.05）；白念珠菌耐VRC組ERG4基因mRNA表達(dá)量（3.99±2.72）顯著高于敏感組的表達(dá)量（1.85±1.41）（ t?為2.817，P＜0.05）。
　?。?）白念珠菌對(duì)FCA、ITR、VRC同時(shí)耐藥

6、菌株組ERG4基因mRNA表達(dá)量（4.38±2.66）顯著高于敏感組的表達(dá)量（1.63±1.70）（t為2.765，P＜0.05）；
　?。?）對(duì)FCA、ITR和VRC同時(shí)敏感的菌株CA133存在同義突變C711T，其mRNA表達(dá)量（0.01±0.00）很低；對(duì)FCA、ITR和VRC同時(shí)耐藥的菌株CA137存在同義突變C435T；其mRNA表達(dá)量（2.06±0.20）較高。
　　結(jié)論：
　　(1)白念珠菌耐藥菌株存在E