念珠菌ERG3基因突變對(duì)抗真菌藥物耐藥的作用.pdf

1、背景：
　　 近年來(lái)，侵襲性真菌感染發(fā)病率不斷上升，以念珠菌感染為主，其中白念珠菌為主。但由于預(yù)防性使用抗真菌藥物，非白念珠菌尤其是對(duì)氟康唑天然耐藥的克柔念珠菌感染出現(xiàn)上升趨勢(shì)，但白念珠菌感染仍占優(yōu)勢(shì)。隨著白念珠菌和克柔念珠菌對(duì)唑類(lèi)抗真菌藥物的耐藥現(xiàn)象越來(lái)越嚴(yán)重，深入研究其耐藥機(jī)制迫在眉睫。
　　 目的：
　　 調(diào)查本院住院患者侵襲性真菌感染的病原學(xué)特征及相關(guān)危險(xiǎn)因素。了解白念珠菌和克柔念珠菌對(duì)常用抗真菌藥物的敏

2、感性，對(duì)白念珠菌耐藥菌株和敏感菌株ERG3基因擴(kuò)增、測(cè)序、生物信息學(xué)分析，明確白念珠菌ERG3基因突變與抗真菌藥物耐藥之間的關(guān)系。
　　 方法：
　　 收集2006-2010年山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院452例住院患者無(wú)菌體液標(biāo)本，使用沙氏培養(yǎng)基、玉米吐溫80瓊脂培養(yǎng)基、CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基和API20CAUX鑒定系統(tǒng)進(jìn)行念珠菌的分離和鑒定。從中分別選取35株白念珠菌和20株克柔念珠菌進(jìn)行體外藥物敏感性試驗(yàn)

3、，確立耐藥菌株和敏感菌株。對(duì)白念珠菌ERG3基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序，最后應(yīng)用BLAST軟件進(jìn)行比對(duì)分析。
　　 結(jié)果：
　　 (1)檢山的163株真菌中，白念珠菌54.61％，非白念珠菌42.94%，霉菌2.45%。其中非白念珠菌從高到低依次為克柔念珠菌(16.57%)、光滑念珠菌(14.72%)、熱帶念珠菌(4.91%)、近平滑念珠菌(4.29%)和葡萄牙念珠菌(2.45%)；Logistic多因素回歸分析結(jié)果顯示：

4、性別、病程、體溫、預(yù)防性使用抗真菌藥物、免疫抑制劑、有創(chuàng)傷的檢查和治療、患者預(yù)后和地域因素是住院患者無(wú)菌體液標(biāo)本中侵襲性真菌感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　 (2)從中選取的35株白念珠菌體外藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示：白念珠菌對(duì)5-氟胞嘧啶和兩性霉素B敏感性為100%，對(duì)伊曲康唑、伏立康唑和氟康唑有不同程度的耐藥，耐藥率分別是17.14%、11.43%、8.57%，而且存在交叉耐藥和多重耐藥情況：20株克柔念珠菌體外藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯

5、示：克柔念珠菌對(duì)伏立康唑和兩性霉素B有較高的敏感性,5-氟胞嘧啶、氟康唑和伊曲康唑有不同程度的耐藥，耐藥率分別是20.00%、50.00%、45.00%，也有交叉耐藥和多重耐藥現(xiàn)象。
　　 (3)本研究顯示白念珠菌臨床耐藥菌株和敏感菌株的ERG3基因均存在突變位點(diǎn)，共檢出9個(gè)點(diǎn)突變，其中耐藥菌株A17號(hào)同時(shí)存在1個(gè)同義突變和4個(gè)錯(cuò)義突變。A17號(hào)菌株同義突變位點(diǎn)為1080bp。突變前堿基所在的密碼子為GGC，所編碼的氨基酸為甘氨

6、酸，未引起氨基酸的改變。4個(gè)錯(cuò)義突變位點(diǎn)分別為1340L、V374G、P902L、V1076A，突變發(fā)生氨基酸置換。第100位堿基由A突變?yōu)镃，導(dǎo)致第340位氨基酸由異亮氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榱涟彼?；?34位堿基由T突變?yōu)镚，導(dǎo)致第374位氨基酸由纈氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楦拾彼?，?62位堿基由C突變?yōu)門(mén)，導(dǎo)致第902位氨基酸由脯氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榱涟彼?；?36位堿基由T突變?yōu)镃，導(dǎo)致第1076位氨基酸由纈氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楸彼?，這4個(gè)點(diǎn)突變?cè)谄渌墨I(xiàn)中尚未見(jiàn)報(bào)道，是本

7、實(shí)驗(yàn)新發(fā)現(xiàn)的突變位點(diǎn)。其余菌株均為同義突變，突變位點(diǎn)分別是602bp、795bp、969bp、1080bp、1110bp，未引起氨基酸改變。
　　 結(jié)論：
　　 (1)白念珠菌感染仍占優(yōu)勢(shì)，但非白念珠菌感染明顯上升，尤其是對(duì)氟康唑天然耐藥的克柔念珠菌，臨床醫(yī)師應(yīng)重視發(fā)生的這一流行病學(xué)變化。
　　 (2)體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果提示：白念珠菌對(duì)唑類(lèi)藥物有不同程度的耐藥，并且對(duì)伊曲康唑的耐藥率高于氟康唑，但大多數(shù)菌株是敏感菌