TET1在腎癌中表達(dá)及其抑制腫瘤的作用機(jī)制研究.pdf

1、腎癌，又稱腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma，RCC)，是一種泌尿系統(tǒng)特有的惡性腫瘤，發(fā)病率次于膀胱癌，在泌尿系腫瘤中占據(jù)第二位。由于其不具備特異的臨床病癥狀，使得早期診斷和治療具有一定的難度。目前，RCC病例中有30％-50％屬于偶然發(fā)現(xiàn)的無癥狀患者，而且，約30％的患者在診斷時已經(jīng)或?qū)l(fā)生轉(zhuǎn)移病變。研究發(fā)現(xiàn)，早期侵襲轉(zhuǎn)移是造成腫瘤預(yù)后不良的主要原因，而且，發(fā)現(xiàn)基因甲基化與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。TET1(Ten El

2、even Translocation1)是體內(nèi)一種高效催化 DNA胞嘧啶的加氧酶，具有明顯的去甲基化作用，在多種腫瘤組織，如肝細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞肺癌、前列腺癌、膀胱癌中低表達(dá)。目前，關(guān)于TET1在RCC發(fā)病機(jī)制中作用尚不明確。因此，探討TET1在RCC侵襲轉(zhuǎn)移中的作用，對RCC的診斷、治療具有極其重要的意義。
　　第一部分 TET1在腎癌組織中的表達(dá)
　　目的：檢測TET1在腎癌組織、癌旁組織的表達(dá)差異。
　　方法：采用

3、實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR）檢測82例腎癌患者的癌組織和癌旁組織 TET1 mRNA的表達(dá)水平，同時采用免疫組化（Immunohistochemistry）和蛋白質(zhì)印跡法（Western blot, WB）對癌組織和癌旁組織中的TET1蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測，對檢測結(jié)果進(jìn)行對比、分析。
　　結(jié)果： qRT-PCR結(jié)果顯示腎癌組織中TET1 mRNA的表達(dá)水平明顯低于癌旁組

4、織（p<0.05）。免疫組化與蛋白質(zhì)印跡法的結(jié)果顯示，腎癌組織中TET1蛋白表達(dá)平明顯低于癌旁組織（p<0.05）。
　　結(jié)論：TET1 mRNA及蛋白表達(dá)水平在腎癌組織中均顯著下調(diào)，表明TET1可能直接或間接的參與腎癌的發(fā)生與發(fā)展。
　　第二部分腎癌TET1低表達(dá)在臨床中的意義
　　目的：對比TET1在腎癌組織和癌旁組織的表達(dá)水平，并分析腎癌病理分級、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TET1表達(dá)與腎癌患者預(yù)后的關(guān)系。
　

5、　方法：對性別、年齡、分期、分級等臨床病理參數(shù)、TET1表達(dá)與術(shù)后生存進(jìn)行相關(guān)性分析，采用Kaplan-Meier法對腎癌患者進(jìn)行生存分析，以log rank比較生存率。p<0.05或p<0.01時認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：生存分析結(jié)果顯示，TET1表達(dá)越低，生存期越短。單因素及多因素分析表明，腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TET1低表達(dá)導(dǎo)致的DNA高度甲基化與腎癌的預(yù)后有關(guān)。
　　結(jié)論： TET1的表達(dá)水平與腎癌患者的預(yù)后密

6、切相關(guān)。
　　第三部分 TET1對腎癌細(xì)胞功能及腫瘤進(jìn)展的影響
　　目的：通過細(xì)胞功能實驗，研究分析TET1表達(dá)與腎癌細(xì)胞功能及腫瘤進(jìn)展的關(guān)系。
　　方法：首先使用蛋白質(zhì)印跡法（WB）測定腎癌細(xì)胞系 ACHN和人胚腎細(xì)胞系293T中的表達(dá)水平，然后采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）法測定腎癌細(xì)胞ACHN和293T細(xì)胞的增殖能力，Transwell小室檢測腎癌細(xì)胞ACHN和293T的侵襲能力，對實驗

7、結(jié)果進(jìn)行比較分析。
　　結(jié)果：與293T細(xì)胞相比，TET1在腎癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN的表達(dá)顯著降低（p<0.05）。CCK-8和Transwell小室檢測結(jié)果顯示，TET1低表達(dá)的腎癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN的增殖能力和侵襲能力均顯著高于TET1高表達(dá)的293T。
　　結(jié)論： TET1在腎癌細(xì)胞系中低表達(dá)，提示TET1可能參與腎癌的發(fā)生和發(fā)展。
　　第四部分 TET1過表達(dá)對腎癌細(xì)胞凋亡和侵襲能力的影響和可能的分子機(jī)制
　　目的

8、:研究分析TET1過表達(dá)對腎癌細(xì)胞凋亡和侵襲能力的影響及可能的分子機(jī)制。
　　方法:首先轉(zhuǎn)染TET1過表達(dá)質(zhì)粒于腎癌細(xì)胞ACHN，采用蛋白質(zhì)印跡法（WB）檢測 TET1在過表達(dá)質(zhì)粒和對照質(zhì)粒的腎癌細(xì)胞 ACHN的表達(dá)水平，然后使用Annexin V和PI染色的方法通過流式細(xì)胞儀檢測兩種細(xì)胞的凋亡情況；Transwell法分析兩種細(xì)胞的侵襲能力，對結(jié)果進(jìn)行比較分析。WB法檢測過表達(dá) TET1對 Wnt信號信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影