HBV對中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)形成的影響.pdf

1、中性粒細胞是人體重要免疫細胞，是機體抵御病原體第一道防線的重要組成部分。2004年Brinkmann等首先發(fā)現(xiàn)中性粒細胞活化后會在胞外形成一種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)-中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)（neutrophil extracellar traps，NETs），為其重要防御機制之一。形態(tài)上， NETs主要由網(wǎng)狀纖維及其許多附著顆粒構(gòu)成；特異性熒光分析顯示NETs由雙鏈DNA（dsDNA）網(wǎng)狀纖維和附著成分髓過氧化物酶（myeloperoxidase, M

2、PO）、組蛋白和中性粒細胞彈性蛋白酶（neutrophil elastase, NE）等組成。研究發(fā)現(xiàn)病原微生物、促炎因子（IL-8、TNF-α）、活化血小板、內(nèi)皮細胞和乙酸肉豆蔻佛波酯( phorbolmyristate acetate, PMA)等多種生物、化學(xué)因子可以刺激中性粒細胞NETs形成。中性粒細胞受刺激后活化生成NETs，捕獲限制病原微生物，加速機體對其的吞噬清除，增強機體的抗感染免疫。乙肝病毒HBV感染是引起肝臟疾病的常

3、見原因之一，多數(shù)慢性乙肝持續(xù)感染的病人肝細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)肝炎病毒高復(fù)制率，會導(dǎo)致肝纖維化、肝衰竭，最終轉(zhuǎn)變?yōu)楦伟┑娘L險很高。慢性乙型肝炎是HBV持續(xù)性感染引起的常見傳染病，機體免疫系統(tǒng)不能有效清除病毒是HBV持續(xù)性感染形成的主要機制。研究亦發(fā)現(xiàn)HBV可感染中性粒細胞形成肝外潛伏或隱匿感染，能抑制中性粒細胞的遷移，乙肝病人還存在中性粒細胞結(jié)構(gòu)改變和功能障礙，提示HBV感染可能影響中性粒細胞抗感染免疫，免疫功能的異常可能是HBV持續(xù)感染的重要機制

4、，而中性粒細胞關(guān)鍵抗菌結(jié)構(gòu)NETs有可能參與了HBV對中性粒細胞的影響。
　　目的：
　　1.通過對HBV持續(xù)感染者與非HBV正常對照的外周血中性粒細胞NETs形成釋放能力的對比研究，探討HBV感染對中性粒細胞NETs釋放能力的影響；
　　2.通過對HBV血清學(xué)標志物與其中性粒細胞NETs釋放能力的相關(guān)性研究，探討HBV病毒組分對中性粒細胞NETs釋放能力的影響；
　　3.通過對HBV持續(xù)感染組的HBV-DNA載

5、量與其中性粒細胞NETs釋放能力的相關(guān)性研究，探討HBV復(fù)制程度對中性粒細胞NETs釋放能力的影響；
　　方法：
　　1.分別收集促凝的HBV持續(xù)感染患者和正常對照組外周血各50例，離心吸取血清，化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法行血清HBV血清標志物定量檢測；
　　2.分別收集EDTA-K2抗凝的HBV持續(xù)感染患者和正常對照組外周血各50例，離心吸取血漿，PCR-熒光探針法行血漿HBV-DNA定量檢測；
　　3.分別收集

6、EDTA-K2抗凝的HBV持續(xù)感染患者和正常對照組外周血各50例，密度梯度離心法分離外周血中性粒細胞；
　　4.分離的外周血中性粒細胞，+/-PMA刺激后產(chǎn)生NETs，MNase酶解后收集上清，DNA熒光定量方法測定上清中中性粒細胞釋放NETs-DNA量，NETs形成能力以PMA刺激和未刺激細胞釋放的NETs-DNA比值表示；
　　結(jié)果：
　　1. PMA刺激和未刺激的中性粒細胞釋放的NETs-DNA比值， HBV持續(xù)

7、感染組為1.266+0.2066，而正常對照組為1.460+0.4049，其差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；
　　2. HBV病毒組分中，HBsAg、HBeAg、HBcAb水平與中性粒細胞NETs形成能力呈負相關(guān)（r＜0，p＜0.05）；HBsAb水平與中性粒細胞NETs形成能力呈正相關(guān)（r＞0， p＜0.05），而HBeAb水平與中性粒細胞NETs形成能力無明顯相關(guān)性（p＞0.05）；
　　3. HBV-DNA載量與中性