中性粒細(xì)胞胞外陷阱在細(xì)菌性膿毒癥中的作用及體外形成的研究.pdf

1、目的:
　　探究中性粒細(xì)胞胞外陷阱(neutrophil extracellular traps，NETs)在細(xì)菌性膿毒癥患者外周血中的形成及其隨著疾病進(jìn)程的變化情況，并研究了普通型肺炎克雷伯桿菌(classic Klebsiella pneumoniae，cKP)與粘液型肺炎克雷伯桿菌(hypermucoviscous Klebsiella pneumoniae，hvKP)在體內(nèi)和體外形成NETs的差異。
　　方法:

2、>　　收集2015年5月至11月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院收入的細(xì)菌性膿毒癥患者60例。其中，致病菌為金黃色葡萄球菌的患者有10例，大腸埃希菌10例，銅綠假單胞菌10例，肺炎克雷伯桿菌30例，這當(dāng)中包括普通型肺炎克雷伯桿菌15例，粘液型肺炎克雷伯桿菌15例。此外，選取30名健康體檢者設(shè)置為健康對(duì)照。分別于患者入院的第一天和第七天收集細(xì)菌性膿毒癥患者的外周血，密度梯度沉淀法分離純化中性粒細(xì)胞。熒光染料Sytox Green明確NETs的存在

3、。免疫熒光染色及核染色劑證明組蛋白H3與DNA共定位于NETs。Image-Pro Plus6.0微軟系統(tǒng)對(duì)NETs進(jìn)行定量檢測(cè)，比較膿毒癥患者與健康者外周血中NETs的形成情況及膿毒癥患者經(jīng)過(guò)抗生素治療7天后NETs的變化情況。觀察健康體檢者的中性粒細(xì)胞分別與普通型和粘液型肺炎克雷伯桿菌孵育1小時(shí)后NETs的形成在數(shù)量和形態(tài)等方面有無(wú)不同，并計(jì)算細(xì)菌存活率。
　　結(jié)果:
　　1.60例細(xì)菌性膿毒癥患者的外周血中檢測(cè)到了NE

4、Ts的存在，并且證明了組蛋白H3與DNA共定位于NETs;
　　2.膿毒癥患者外周血中NETs的含量(42.358％±1.967)明顯高于健康體檢者(0.262％±0.041),(P＜0.05);
　　3.抗生素治療7天后，處于感染消散期患者體內(nèi)NETs的含量(19.793％±1.917)明顯低于仍處在感染期的患者(51.191％±5.550)，(P＜0.05);
　　4.由粘液型肺炎克雷伯桿菌(hvKP)引起的細(xì)菌性

5、膿毒癥患者的外周血中NETs的含量(53.865％±1.385)明顯高于由普通型肺炎克雷伯桿菌(cKP)引起的(27.628％±1.425),(P＜0.05);
　　5.兩種不同表型的肺炎克雷伯桿菌分別與健康體檢者中性粒細(xì)胞作用1小時(shí)后，粘液型肺炎克雷伯桿菌誘發(fā)健康體檢者中性粒細(xì)胞釋放的NETs的含量(44.581％±2.225)明顯高于普通型肺炎克雷伯桿菌所釋放的(28.022％±1.416)，(P＜0.05);
　　6.

6、兩種不同表型的肺炎克雷伯桿菌分別與健康體檢者中性粒細(xì)胞作用1小時(shí)后，粘液型肺炎克雷伯桿菌的存活率(71.660％±1.446)明顯高于普通型肺炎克雷伯桿菌(32.579％±1.155)，(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　本次試驗(yàn)明確了細(xì)菌性膿毒癥患者外周血中NETs的存在，且其含量明顯高于健康對(duì)照組(P＜0.05)。DNA和組蛋白H3共定位于NETs。在膿毒癥疾病進(jìn)程中，NETs不僅具有強(qiáng)大的抗菌作用，還可能導(dǎo)致組織損傷和

7、器官功能障礙。隨著抗生素的使用，NETs的表達(dá)呈動(dòng)態(tài)變化，消散期患者體內(nèi)的NETs的含量明顯低于感染期患者(P＜0.05)，并且NETs釋放的峰值并不與感染時(shí)相的峰值同步。粘液型肺炎克雷伯桿菌與普通型肺炎克雷伯桿菌在體內(nèi)、體外都可以誘發(fā)NETs的形成，但形成NETs的模式有差異。普通型肺炎克雷伯桿菌更易被中性粒細(xì)胞殺滅。粘液型肺炎克雷伯桿菌可能通過(guò)某些機(jī)制逃離NETs的捕獲。NETs在細(xì)菌性膿毒癥患者中起到重要作用，因此，開(kāi)發(fā)針對(duì)NET