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文檔簡介
1、目的:創(chuàng)建急性CO中毒遲發(fā)性腦?。―EACMP)大鼠模型,檢驗其行為學、形態(tài)學區(qū)別及轉錄因子 NF-E2相關因子2(Nrf2)和血紅素加氧酶1(HO-1)在大鼠海馬區(qū)的表達,初步探討Nrf2及HO-1在DEACMP發(fā)病機制中的作用及兩者可能存在的相互關系,為DEACMP發(fā)病機制的進一步研究提供一定的基礎和方向。
方法:1、將168只無認知功能障礙的健康成年雄性SD大鼠隨機分組:空白對照組(BC組)48只,空氣對照組(AC組)6
2、0只, DEACMP組(CO組)60只,每個組按染毒后第1d、3d、7d、14d、21d、28d六個時相點分為6個亞組,再將三組大鼠隨機分配到6個亞組中(CO組和AC組每個時相點10只大鼠,BC組每個時相點8只大鼠);2、CO組采取改良式腹腔注射法制備 DEACMP大鼠模型,BC組以相同的方式注射等量空氣,AC組不做任何干預;3、采用Morris水迷宮試驗測試大鼠染毒前后認知學習記憶能力,并同時檢測大鼠體內HbCO濃度,判斷造模是否成功
3、;4、HE法觀察大鼠海馬CA1區(qū)病理變化,Tunel法檢測大鼠海馬CA1區(qū)細胞凋亡情況,免疫組化法檢測海馬CA1區(qū)Nrf2及HO-1蛋白的表達情況,Western Blot法檢測大鼠整個海馬Nrf2及HO-1的蛋白表達量。
結果:1、DEACMP模型的建立:①CO中毒癥狀:CO組大鼠染毒后出現(xiàn)躁動、呼吸急促、皮膚黏膜呈現(xiàn)櫻桃紅色、肢體癱軟、動作遲緩,部分大鼠出現(xiàn)肢體強直抽搐、甚至昏迷,其余兩組大鼠無上述異常改變;②動脈血HbC
4、O濃度變化:大鼠在染毒過程中體內的HbCO濃度>50%維持時間超過16h;③Morris水迷宮結果:染毒前及染毒后7天內三組大鼠平均躲避潛伏期無明顯差別(P>0.05),染毒后第14-28天 CO組大鼠平均逃避潛伏期較其余兩組顯著延伸(P<0.01),平臺所在象限運動時間、穿越平臺次數(shù)亦較BC、AC組明顯減少(P<0.01)。2、HE染色:BC、AC組大鼠染毒前后神經(jīng)元形態(tài)基本正常,而CO組大鼠染毒后海馬區(qū)神經(jīng)元隨時間的變化出現(xiàn)不同程度
5、的病理改變:細胞水腫、核固縮、核碎裂、錐體細胞減少、排列稀疏紊亂等;3、Tunel檢測:BC組和AC組大鼠海馬CA1區(qū)細胞凋亡現(xiàn)象不明顯,而CO組大鼠海馬CA1區(qū)凋亡細胞第1天起開始逐漸增多,第7天達高峰(20.20±1.78)后逐漸減少,第28天凋亡仍然存在,且每個時間點其凋亡指數(shù)較BC組和AC組均顯著增高(P<0.01)。4、Nrf2和HO-1蛋白的表達:①免疫組化法:Nrf2和HO-1蛋白在BC組和AC組大鼠海馬CA1區(qū)表達均不明
6、顯,且各時間點表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),在CO組大鼠染毒后第1天Nrf2和HO-1即開始增高,均在第3天達高峰(8.20±1.08,9.04±1.13)后開始減少,第28天仍維持在較高表達水平,且二者表達在每個時間點均較AC組、BC組明顯增加(P<0.01);②蛋白質印跡法(Western Blot)檢測:AC、BC組大鼠海馬Nrf2及HO-1蛋白表達量較少,且各時間點表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),CO組大鼠海馬Nr
7、f2及HO-1蛋白表達量均呈現(xiàn)出增高-高峰(第3天)-降低的趨勢,在第28天表達量仍處于較高水平,且二者表達在每個時間點均較AC組、BC組明顯增加(P<0.01)。
結論:1、改良式腹腔間隔注射法創(chuàng)建DEACMP模子,與人類起病的病理程序相似,操作簡化易行,相對安全,實驗器材常見,CO劑量易控制,是一種制備DEACMP動物模型比較理想的方法;2、Morris水迷宮實驗通過測試大鼠染毒前后的行為學改變(認知學習記憶能力),結合大
8、鼠體內HbCO濃度,可初步判斷大鼠是否出現(xiàn)DEACMP;3、大鼠DEACMP的發(fā)生發(fā)展很可能與大鼠海馬區(qū)錐體細胞遲發(fā)性凋亡有關;4、Nrf2和HO-1在DEACMP的發(fā)病機制中起著雙重作用:在CO中毒前期(3天內),大鼠海馬Nrf2快速增高,通過促進其下游因子HO-1的表達,共同發(fā)揮抗細胞凋亡的作用;而后期(3天后) Nrf2持續(xù)過量表達,導致下游因子 HO-1及其產(chǎn)物的堆積,很可能又促進了海馬區(qū)錐體細胞發(fā)生遲發(fā)性凋亡,是CO中毒發(fā)展為
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