CD20+B細胞淋巴瘤細胞IDO-Kyn-AHR信號通路表達的研究.pdf

1、目的：彌漫大 B細胞淋巴瘤在所有非霍奇金淋巴瘤中最為常見，是一組高度異質性和高增殖活性的惡性腫瘤，其標準化療方案使約50％患者疾病完全緩解。利妥昔單抗的運用使 DLBCL的治療進入了一個全新的時代，患者疾病完全緩解率和總生存率得到進一步的提高，但是仍有約40%患者疾病進展復發(fā)。隨著我們更深入的研究腫瘤發(fā)生發(fā)展機制，我們發(fā)現(xiàn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展可能與參與免疫逃逸的某些基因異常表達相關，深入的認識這些基因的異常表達對抗腫瘤免疫系統(tǒng)的具體作用過程，

2、并有針對性的阻斷導致免疫逃逸的關鍵通路，是提高腫瘤治療效果的重要方法。IDO是色氨酸代謝途徑中的關鍵酶，IDO的高表達和活性增高與免疫逃逸密切相關，IDO亦是腫瘤免疫治療中的熱點。IDO高表達于多種人類實體腫瘤和血液淋巴系統(tǒng)腫瘤。在淋巴瘤中，亦有多項研究證實IDO高表達于DLBCL患者的腫瘤細胞中，IDO高表達與預后不良相關。在本團隊的前期實驗中，證實了利妥昔單抗耐藥的其中一個作用機制即為DLBCL細胞中的IDO高表達。諸多報道IDO/

3、Kyn/AHR信號通路參與免疫調節(jié)系統(tǒng)，IDO過表達，導致局部色氨酸消耗，代謝產物犬尿氨酸蓄積，AHR激活并發(fā)生核轉位，靶基因轉錄表達，促使Treg細胞分化增殖，抑制效應T細胞增殖活化，導致免疫逃逸。但IDO是否通過啟動IDO/Kyn/AHR通路，導致腫瘤免疫逃逸，還有待進一步研究證實。本研究旨在通過1-MT、CH223919分別抑制Raji細胞和JeKo-1細胞中IDO、AHR的表達，來觀察IDO/Kyn/AHR信號通路中各個信號分子

4、的表達情況。
　　方法：1、體外培養(yǎng) Raji和JeKo-1細胞系，應用熒光定量PCR方法檢測 IDOmRNA和AHRmRNA的相對表達水平，以及使用 IDO抑制劑（1-MT）或者AHR抑制劑（CH223191）以不同濃度不同時間作用細胞后后，檢測 IDOmRNA和 AHRmRNA相對表達水平的變化；2、1-MT或CH223191以不同濃度作用 Raji細胞和JeKo-1細胞24h后，收集細胞上清，比色法分別檢測細胞上清中色氨酸和

5、犬尿氨酸的含量。
　　結果：1、熒光定量PCR結果顯示：（1）1-MT5，25μm/L分別作用于 Raji細胞和JeKo-1細胞0.5h、1h、2h后，測得IDOmRNA和AHRmRNA相對表達量下降，并隨著1-MT濃度的增加及作用時間的延長， IDOmRNA、AHRmRNA相對表達水平逐漸下降，以1-MT濃度組25μmol/L濃度及作用2h時下降最明顯（P＜0.05）。但1-MT作用于JeKo-1細胞0.5h后，5μmol/L濃

6、度組和25μmol/L濃度組間雖然IDOmRNA表達水平逐漸下降，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（2）CH2231915，25μm/L作用于 Raji細胞和JeKo-1細胞0.5h、1h、2h后，測得IDOmRNA和AHRmRNA相對表達量下降，隨著 CH223191濃度的增加或作用時間的增加，IDOmRNA和AHRmRNA相對表達量水平下降更為明顯，以25μmol/L濃度或作用2h時最明顯（P＜0.05）。但CH2231915μ

7、m/L作用于JeKo-1細胞后，0.5h組和1h組間 IDOmRNA表達水平雖然逐漸下降，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（3）1-MT和CH223191分別作用于Raji細胞和JeKo-1細胞后，隨著濃度增加或作用時間延長，IDOmRNA和AHRmRNA相對表達量均下降，行相關性分析顯示二者存在極強正相關關系（R＞0.8，P＜0.05）。2、細胞上清犬尿氨酸、色氨酸含量測定：1-MT（5，25μm/L）和CH223191（5，25