CD20+B細(xì)胞在胃癌中的分布、表型及免疫功能的初步研究.pdf

1、胃癌是人類最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)惡性腫瘤中其發(fā)病率和死亡率均位居前三。胃癌免疫一直伴隨著胃癌的發(fā)生發(fā)展及臨床轉(zhuǎn)歸，而胃癌組織中免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)及其功能調(diào)控則是影響胃癌進(jìn)展的關(guān)鍵因素。
　　目前研究證實(shí)，在胃癌微環(huán)境中，包括調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、髓樣來(lái)源的抑制性細(xì)胞(myeloid derived suppressor cells，MDSC)和腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞等在內(nèi)的多個(gè)免疫細(xì)胞群參與促進(jìn)胃癌的進(jìn)展，而CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞等作為抗腫

2、瘤效應(yīng)性細(xì)胞在抵抗胃癌進(jìn)展中發(fā)揮了重要作用。近年關(guān)于乳腺癌、卵巢癌、頭頸部癌、非小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸癌、黑色素瘤等惡性腫瘤的研究發(fā)現(xiàn)，一群表達(dá)CD20的B細(xì)胞即CD20+B細(xì)胞在腫瘤組織中大量浸潤(rùn)，且腫瘤浸潤(rùn)的CD20+B細(xì)胞與患者的預(yù)后密切相關(guān)。然而，在胃癌微環(huán)境中是否存在著CD20+B細(xì)胞的浸潤(rùn)及其發(fā)揮怎樣的免疫功能并不清楚。因此，本文擬對(duì)CD20+B細(xì)胞在胃癌中的分布、表型特征及免疫調(diào)控功能進(jìn)行初步研究，以期為發(fā)展胃癌的免疫治療方案提

3、供新的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
　　目的：
　　1.明確CD20+B細(xì)胞在胃癌中的分布和表型特征。
　　2.初步研究CD20+細(xì)胞在胃癌中的免疫調(diào)控功能。
　　方法：
　　1.CD20+B細(xì)胞在胃癌中的分布和表型特征表達(dá)研究
　　收集重慶第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院普外科30例胃癌患者手術(shù)切除的組織標(biāo)本（同一患者的癌組織、癌旁組織和正常組織）和外周血。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD20+B細(xì)胞的比例和數(shù)目。流式細(xì)胞術(shù)分析CD20+

4、B細(xì)胞表面受體和功能相關(guān)分子(CD80、CD86、CD40、IgM、IgG、HLA-ABC、HLA-DR、IgD、CD39、CD73、CD69、TRAIL)和趨化因子受體表達(dá)情況。同時(shí)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)CD20+B細(xì)胞在癌組織和正常組織中的分布情況。
　　2.CD20+B細(xì)胞在胃癌中免疫功能的初步研究
　　流式分選胃癌組織和正常組織中的CD20+B細(xì)胞以及分選相同患者的外周血T細(xì)胞，按1∶1比例進(jìn)行體外共培養(yǎng)，5天后

5、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其中的T細(xì)胞增殖和IFN-γ的表達(dá)情況。此外，利用免疫組織化學(xué)雙重染色對(duì)癌組織中CD20+B細(xì)胞與IL-10進(jìn)行共定位檢測(cè)。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　采用GraphPad Prism5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，多個(gè)組之間的比較采用單因素方差分析，兩組之間的比較采用T檢驗(yàn)，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1.CD20+B細(xì)胞在胃癌中的分布結(jié)果
　　1.1流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胃癌患者不同標(biāo)本

6、中CD20+B細(xì)胞的比例:在30例被檢標(biāo)本中，其外周血、正常組織、癌旁組織、癌組織CD20+B細(xì)胞占CD45+細(xì)胞比例均值分別為2.27％±0.35％、8.86％±1.55％、9.23％±1.46％、17.92％±2.24％。統(tǒng)計(jì)分析表明:胃癌組織中的CD20+B細(xì)胞比例與外周血、正常組織及癌旁組織相比較均具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.001，P=0.002，P=0.002)，癌旁組織和正常組織中CD20+B細(xì)胞的比例與外周血相比較均具

7、有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.001)，而癌旁組織中CD20+B細(xì)胞的比例與正常組織相比較并無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.863)。
　　1.2免疫組化染色結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示:癌組織中的CD20+B細(xì)胞數(shù)目與正常組織相比較具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。
　　1.3胃癌患者CD20+B細(xì)胞的表型檢測(cè)結(jié)果
　　1.3.1 CD20+B細(xì)胞表面免疫球蛋白分子的表達(dá)結(jié)果
　　胃癌患者外周血和不同組織中CD20+B細(xì)

8、胞均表達(dá)IgM和IgD而不表達(dá)IgG，但組織中CD20+B細(xì)胞表達(dá)的IgM和IgD顯著低于外周血，提示組織中的CD20+B細(xì)胞為成熟的B細(xì)胞。
　　1.3.2 CD20+B細(xì)胞表達(dá)CD5及共刺激分子的表達(dá)結(jié)果
　　胃癌組織、正常組織中CD20+B細(xì)胞不表達(dá)CD5分子。
　　胃癌組織、正常組織和外周血中CD20+B細(xì)胞表達(dá)HLA-ABC、HLA-DR和CD40但低表達(dá)CD80、CD86。與正常組織和外周血相比，胃癌組織中

9、的CD20+B細(xì)胞低表達(dá)HLA-ABC和CD40，提示胃癌微環(huán)境中的CD20+B細(xì)胞激活CD8+T細(xì)胞的能力較弱。
　　1.3.3CD20+B細(xì)胞功能相關(guān)分子的表達(dá)結(jié)果
　　胃癌組織、正常組織和外周血中CD20+B細(xì)胞均不表達(dá)TRAIL和PD-L1;與外周血相比，胃癌組織和正常組織中的CD20+B細(xì)胞高表達(dá)CD69和PD-L1但低表達(dá)CD62L，CD39和CD73;而與正常組織相比，胃癌組織中CD20+B細(xì)胞更低表達(dá)CD73

10、。
　　1.3.4 CD20+B細(xì)胞增殖能力Ki-67表達(dá)結(jié)果
　　癌組織中表達(dá)Ki-67的CD20+B細(xì)胞比例顯著高于外周血，但癌組織和正常組織中表達(dá)Ki-67的CD20+B細(xì)胞比例則無(wú)明顯差異。趨化因子受體表達(dá)情況:外周血和癌組織中CD20+B細(xì)胞均不表達(dá)CXCR1、CXCR2和CXCR3，但均高表達(dá)趨化因子受體CXCR4，盡管外周血中CD20+B細(xì)胞高表達(dá)CXCR5，但癌組織中CD20+B細(xì)胞不表達(dá)CXCR5。

11、　　2.CD20+B細(xì)胞在胃癌中免疫功能的初步研究結(jié)果
　　2.1 CD20+B細(xì)胞與CD3+T細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與正常組織對(duì)照組相比較，胃癌組織試驗(yàn)組中CD3+T細(xì)胞增殖比例下降，而且增殖的CD3+T細(xì)胞表達(dá)IFN-γ的比例也下降，提示胃癌組織中的CD20+B細(xì)胞能夠抑制CD3+T細(xì)胞的增殖及其IFN-γ的表達(dá)。
　　2.2免疫組化雙重染色結(jié)果顯示:胃癌組織中CD20分子與IL-10在B細(xì)胞存在共表達(dá)。
　　結(jié)

12、論：
　　1.胃癌組織中CD20+B細(xì)胞占CD45+細(xì)胞的比例顯著高于癌旁組織、正常組織和外周血。免疫組化染色亦表明胃癌組織中的CD20+B細(xì)胞數(shù)量顯著高于正常組織。CD20+B細(xì)胞在胃癌組織中顯示出一定的免疫抑制表型傾向，并高表達(dá)趨化因子受體CXCR4。
　　2.胃癌組織來(lái)源的CD20+B細(xì)胞能夠抑制T細(xì)胞的增殖和IFN-γ的表達(dá)，且胃癌組織中的CD20+B細(xì)胞可表達(dá)IL-10，提示胃癌浸潤(rùn)的CD20+B細(xì)胞具有免疫抑制功