間變性大細(xì)胞淋巴瘤中間變性淋巴瘤激酶、survivin及mTOR信號通路的研究及其臨床意義.pdf

1、【背景和目的】間變性大細(xì)胞淋巴瘤是一種較少見的、T或null細(xì)胞性非霍奇金淋巴瘤。約60％～85％的ALCL病例表達(dá)ALK融合蛋白。ALK可通過激活PLC-γ、JAK/STAT、PI3K/AKT等信號通路，引起細(xì)胞生長和凋亡調(diào)控失調(diào)導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。在JAK/STAT通路中，活化STAT3可誘導(dǎo)抗凋亡基因bcl-X<,L>及 survivin的表達(dá)。survivin是抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂的一種蛋白。survivin的表達(dá)與腫瘤侵襲性和

2、不良預(yù)后有關(guān)。可用于研究腫瘤發(fā)病、診斷、治療及預(yù)后判斷。在PI3K/AKT通路中，活化的AKT激活mTOR蛋白，調(diào)節(jié)mRNA的翻譯。mTOR通過激活其下游蛋白4E-BPl和p70S6K促進(jìn)蛋白翻譯和合成?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，許多腫瘤伴有mTOR通路上調(diào)。 本研究的第一部分通過檢測81例系統(tǒng)性ALCL病例中ALK、survivin及磷酸化的AKT、mTOR、4E-BP1、p70S6K的表達(dá)，并結(jié)合ALCL組織學(xué)形態(tài)、免疫表型、臨床病理特征及

3、預(yù)后，探討它們在ALCL中表達(dá)的臨床病理意義及相互關(guān)系，比較它們的表達(dá)與ALCL病例預(yù)后的關(guān)系。 本研究的第二部分通過檢測ALK陽性細(xì)胞株中mTOR通路中磷酸化的4E-BP1、p70S6K的表達(dá)，并用rapamycin抑制mTOR蛋白激酶活性，觀察ALK陽性細(xì)胞株磷酸化的4E-BP1、p70S6K表達(dá)的變化，以及細(xì)胞株的生長是否受到抑制，探討ALK激活mTOR通路是否是ALK陽性ALCL可能的分子發(fā)病機(jī)制。 【材料和方法

4、】本研究的第一部分收集了四川大學(xué)華西醫(yī)院81例系統(tǒng)性ALCL的臨床資料并隨訪。組織學(xué)分型采用2001年版WHO關(guān)于淋巴造血組織腫瘤的分類，免疫組化染色采用EnVision法，第一抗體為ALK1、CD30、CD3、CD45RO、CD20、CD79a、EMA、granzyme B、TIA1、survivin、磷酸化的AKT、mTOR、4E-BP1及p70S6K。本研究的第二部分應(yīng)用Western blot法，檢測ALK陽性細(xì)胞株中磷酸化的4

5、E-BP1及p70S6K的表達(dá)情況；并用 rapamycin干預(yù)ALK陽性細(xì)胞株，檢測干預(yù)前、后磷酸化的4E-BP1、p70S6K在ALK陽性細(xì)胞株中表達(dá)的變化；應(yīng)用MTT法檢測干預(yù)后細(xì)胞的生長情況；應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測干預(yù)后細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的改變。 【結(jié)果】組織學(xué)上，81例ALCL中普通型62例(76.5％)、淋巴組織細(xì)胞型2例(2.5％)和小細(xì)胞型17例(21％)。所有細(xì)胞均表達(dá)CD30，55例(67.9％)CD3/CD45

6、RO陽性，26例(32.1％)CD3、CD40RO、CD20、CD79a均陰性，65例(80.2％)TIA1/granzyme B陽性，49例(60.5％)EMA陽性。Ki-67指數(shù)為1％～90％，54例(66.7％)為低表達(dá)病例(表達(dá)率≤60％)，27例(33.3％)為高表達(dá)病例(表達(dá)率>60％)。ALK1在81例ALCL中51例(63％)陽性，其中，核+漿陽性39例(占ALK陽性病例的76.5％)，漿陽性12例(占ALK陽性病例的2

7、3.5％)。ALK表達(dá)與ALCL的組織學(xué)變型、免疫學(xué)表型均不相關(guān)(p>0.05)，ALK表達(dá)模式與ALCL組織學(xué)變型無關(guān)(p>0.05)。 在77例行survivin免疫組化染色病例中，44例(57.1％)為survivin低表達(dá)病例(表達(dá)率≤30％)，33例(42.9％)為高表達(dá)病例(表達(dá)率>30％)。survivin不同表達(dá)狀況與組織學(xué)變型、免疫學(xué)表型及ALK的表達(dá)無關(guān)(p>0.05)，與Ki-67表達(dá)有關(guān)(p<0.05)。

8、 在71例行磷酸化的AKT、mTOR、4E-BP1及p70S6K免疫組化染色病例中，磷酸化AKT陽性54例(76.1％)，為核+漿或漿陽性。磷酸化AKT表達(dá)與ALK表達(dá)相關(guān)(p<0.05)；磷酸化roTOR陽性57例(80.3％)，為漿陽性。磷酸化mTOR表達(dá)與ALK、磷酸化AKT表達(dá)相關(guān)(p<0.05)；磷酸化4E-BP1陽性64例(90.1％)，磷酸化p70S6K陽性66例(93％)，均為核+漿或漿陽性，磷酸化4E-BP1及

9、磷酸化p70S6K表達(dá)與磷酸化mTOR表達(dá)相關(guān)(p<0.05)，與ALK、磷酸化AKT表達(dá)無關(guān)(p>0.05)。本組81例中，男性61例，女性20例，男女比例3.05：1，年齡范圍4～74歲，平均年齡33.0±18.91歲。ALK陽性病例的年齡顯著小于陰性病例(p<0.05)。ALK陽性病例的5年生存率為50％，ALK陰性病例的2年生存率為20％，兩者生存率曲線有顯著性差異(p<0.05)。survivin低表達(dá)病人的5年存活率為55％

10、，高表達(dá)的5年生存率為20％，兩者生存率曲線差異顯著(p<0.05)，同時，在ALK陽性病例中，survivin高表達(dá)預(yù)后較低表達(dá)的差(p<0.05)。而磷酸化的AKT、mTOR、4E-BP1及p70S6K的表達(dá)均與病人的性別、年齡及預(yù)后無關(guān)(p>0.05)Western blot法檢測發(fā)現(xiàn)ALK陽性ALCL細(xì)胞株Karpas299及BaF3/ATIC-ALK中磷酸化的4E-BP1及p70S6K的表達(dá)明顯多于無ALK蛋白表達(dá)的BaF3細(xì)

11、胞。rapamycin干預(yù)后，Karpas299及BaF3/ATIC-ALK中磷酸化的4E-BP1及p70S6K的表達(dá)明顯下降，rapamycin對ALK陽性細(xì)胞株的生長、增殖抑制作用明顯，流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)Karpas299及BaF3/ATIC-ALK中出現(xiàn)顯著的G1期停滯及凋亡。 【結(jié)論】 1.ALK陽性與ALK陰性ALCL在臨床病理上的不同，提示兩者可能為不同的淋巴瘤實體； 2.survivin高表達(dá)的AL

12、CL病例預(yù)后差，survivin表達(dá)與ALK不相關(guān)、是一個獨立的預(yù)后指標(biāo)； 3.磷酸化的AKT、mTOR、4E-BP1和p70S6K在ALCL病例中均表達(dá)，在ALK陽性病例中表達(dá)率高于陰性病例，磷酸化的AKT、mTOR表達(dá)與ALK表達(dá)相關(guān)，提示在ALK陽性ALCL中存在AKT/mTOR通路的激活； 4.ALK陽性ALCL中ALK激酶激活了mTOR通路；抑制mTOR活性，可抑制ALK陽性細(xì)胞株腫瘤性生長，提示ALK激活其下