氣單胞菌屬來源的新型普魯蘭酶的鑒定及其編碼基因的克隆與表達.pdf

1、普魯蘭降解酶(pullulan degrading enzymes)廣泛存在于動物、植物和微生物中，它能夠?qū)Ｒ凰馄蒸斕m多糖α-1，6糖苷鍵或特定位置的α-1，4糖苷鍵。普魯蘭降解酶在工業(yè)、洗滌去污業(yè)、醫(yī)療保健等行業(yè)中應(yīng)用十分廣泛，具有重要的應(yīng)用意義。本研究以稻田、菜地土壤及污泥為采集樣品，采用唯一碳源法篩選到1株產(chǎn)普魯蘭降解酶的菌株3G2，在可溶性淀粉為底物誘導(dǎo)條件下表達，搖瓶發(fā)酵產(chǎn)普魯蘭酶的水平達到24.8 U/mL。通過對該菌株的

2、形態(tài)觀察及16S rDNA分析鑒定3G2菌株來源于細菌中的氣單胞菌屬(Aeromonas sp.3G2)，本研究首次通過實驗的方法篩選到氣單胞菌屬來源的產(chǎn)普魯蘭酶菌株。通過設(shè)計保守引物，PCR方法獲得Aeromonas sp.3G2普魯蘭酶基因pluAs，全長4053 bp，鑒定為新的普魯蘭酶基因。該基因編碼1351個氨基酸，蛋白具有4個保守結(jié)構(gòu)域(PUD、CBM48、GH13、DUF)。本研究通過PCR的方法擴增了pluAs基因不同的

3、區(qū)段，分別是:PluAs蛋白的四個核心結(jié)構(gòu)域（22～1114位氨基酸，PluAs-1），去除PUD結(jié)構(gòu)域的基因片段（149～1344位氨基酸，PluAs-2），革蘭氏陰性菌普魯蘭酶的保守結(jié)構(gòu)域（149～1114位氨基酸，PluAs-3），GH13核心催化結(jié)構(gòu)域(538～935位氨基酸，PluAs-4)。利用大腸桿菌表達體系重組表達并獲得了多種具有活性的普魯蘭酶片段（PluAs-1、PluAs-2、PluAs-3）。重組表達的普魯蘭酶最適