大鼠發(fā)育過(guò)程中視網(wǎng)膜NgR蛋白的表達(dá)及RNA干擾對(duì)NgR基因表達(dá)調(diào)控的研究.pdf

1、NgR(Nogo receptor)是中樞神經(jīng)元細(xì)胞膜上的一種蛋白，該蛋白和p75<'NTR>及LINGO-1這兩種中樞神經(jīng)元細(xì)胞膜蛋白組成復(fù)合受體，介導(dǎo)了中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓磷脂中MAG、OMgp、Nogo對(duì)中樞神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)的抑制作用，從而造成了成年哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)損傷后再生困難。在這個(gè)復(fù)合受體中NgR是抑制信號(hào)傳入細(xì)胞內(nèi)的第一步，因此，它的存在是中樞神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)受到抑制的關(guān)鍵。 RNA干擾是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新的抑制特定基因

2、產(chǎn)物表達(dá)的方法，它通過(guò)雙鏈RNA的介導(dǎo)引起特異性的內(nèi)源性的與之序列相近的mRNA的降解，從而阻斷相應(yīng)基因的表達(dá)，造成轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默。因其具有簡(jiǎn)單快速、特異、高效和經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)，該方法廣泛應(yīng)用于基因功能和基因治療研究。 根據(jù)這些研究，我們認(rèn)為，如果能通過(guò)RNA干擾沉默NgR基因的表達(dá)，減少或阻止NgR蛋白的產(chǎn)生，使神經(jīng)生長(zhǎng)抑制信號(hào)無(wú)法通過(guò)該蛋白組成的受體抑制神經(jīng)生長(zhǎng)，有可能促進(jìn)損傷后視神經(jīng)的再生修復(fù)以及功能的恢復(fù)，從而挽救視功

3、能。 本實(shí)驗(yàn)的目的：觀察正常大鼠視網(wǎng)膜發(fā)育過(guò)程中NgR蛋白表達(dá)的情況；研究siRNA對(duì)NgR基因表達(dá)的抑制作用。 本實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分：1、使用免疫組化的方法觀察正常大鼠視網(wǎng)膜發(fā)育過(guò)程中NgR蛋白的表達(dá)情況。2、研究siRNA對(duì)富含NgR蛋白的體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)細(xì)胞的NgR基因表達(dá)的抑制作用，為RNA干擾技術(shù)在視神經(jīng)損傷修復(fù)過(guò)程中的應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 主要結(jié)果和結(jié)論如下： 1、出生24h的新生SD大鼠的視網(wǎng)膜

4、上就已經(jīng)存在NgR的表達(dá)，并且該表達(dá)貫穿于視網(wǎng)膜發(fā)育成熟的整個(gè)階段，提示髓磷脂蛋白抑制因子和NgR之間的相互作用對(duì)神經(jīng)元不僅僅是生長(zhǎng)抑制作用，可能對(duì)神經(jīng)元的生長(zhǎng)、發(fā)育和塑形都有影響。 2、以NgR基因?yàn)槟繕?biāo)，根據(jù)siRNA的設(shè)計(jì)原則，體外化學(xué)合成siRNA，并使用陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑對(duì)體外培養(yǎng)的富含NgR蛋白的海馬神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行RNA干擾，結(jié)果在轉(zhuǎn)染48h后顯著下調(diào)了NgR基因的表達(dá)，但在一個(gè)星期后NgR基因的表達(dá)又恢復(fù)到了正常的