中間絲蛋白在大鼠視網(wǎng)膜發(fā)育和多種視網(wǎng)膜病變中的表達.pdf

1、Nestin是中間絲蛋白的一種，主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中的神經(jīng)前體細胞/神經(jīng)干細胞上表達，因此在基礎(chǔ)和臨床研究中它被廣泛用于鑒定神經(jīng)干細胞。成年哺乳動物視網(wǎng)膜中，Nestin陽性細胞主要位于睫狀體無色素上皮部位，因此很多學者認為這些Nestin陽性細胞的存在是視網(wǎng)膜再生的基礎(chǔ)。最近研究報導(dǎo)，雞眼玻璃體腔注射NMDA后在Mnller細胞上出現(xiàn)Transtin的誘導(dǎo)表達，nanstin和Nestin屬同一類的可以在神經(jīng)干細胞上表達的中間絲蛋

2、白，并推測病理情況下這些Mller細胞具有潛在神經(jīng)干細胞的特性，同時辦有研究表明人胎兒視網(wǎng)膜Mller細胞表達Nestin，由此我們設(shè)計了本實驗，從Mller細胞發(fā)育，體外和體內(nèi)三方面探討Nestin和另一種中間絲蛋白GFAP在Mller細胞上的表達規(guī)律及意義。 第一部分中間絲蛋白在大鼠視網(wǎng)膜發(fā)育過程中的表達 目的：探討中間絲蛋白Nestin和GFAP在大鼠視網(wǎng)膜發(fā)育過程中的定位及變化，中

3、間絲蛋白與Mller細胞、神經(jīng)節(jié)細胞和星形膠質(zhì)細胞的關(guān)系及存在的意義。 方法：分別于大鼠生后0d，l，2，3，4，7，12和20w取大鼠眼球行矢狀位冰凍切片，免疫熒光雙標確定中間絲蛋自在視網(wǎng)膜中的細胞定位，Real-time PCR方法進行定量分析。 結(jié)果： 1、出生Od Nestin免疫陽性細胞貫穿神經(jīng)視網(wǎng)膜的全層，主要定位于視網(wǎng)膜前體細胞放射狀排列的細長纖維中，此時尚無明確的Mller細胞發(fā)生

4、，此時在視網(wǎng)膜內(nèi)側(cè)出現(xiàn)GFAP陽性細胞。 2、生后1w出現(xiàn)表達GS的Mller細胞，這些細胞同時表達Nestin，不表達GFAP，GFAP陽性細胞仍然位于視網(wǎng)膜內(nèi)側(cè)。 3、生后2w至12w，Nestin在。Mller細胞上的表達逐漸減少直至消失，GFAP的表達沒有顯著變化，主要定位于星形膠質(zhì)細胞。 結(jié)論：在生后大鼠視網(wǎng)膜中，分化中的Mller細胞表達Nestin，隨視網(wǎng)膜發(fā)育日益成熟，Ne

5、stin表達逐漸減少，成年大鼠視網(wǎng)膜Mller細胞不再表達Nestin，從新生鼠至成鼠Mller細胞都不表達GFAP。 第二部分中間絲蛋白在培養(yǎng)的視網(wǎng)膜Mller細胞上的表達 目的：探討中間絲蛋白Nestin和GFAP是否在體外培養(yǎng)的大鼠視網(wǎng)膜Mller細胞上表達及其意義。 方法：取生后7-12天新生鼠視網(wǎng)膜，參考文獻體外培養(yǎng)Mller細胞鑒定并純化，免疫熒光雙標觀察Nes

6、tin和GFAP是否在Mller細胞上表達。 結(jié)果：用GS鑒定體外培養(yǎng)的第四代Mller細胞純度可達97﹪，所有Mller細胞均表達Nestin，陽性染色位于胞漿。培養(yǎng)的Mller細胞無GFAP陽性染色。 結(jié)論：所采用的方法可簡單、快速地獲得高純度地Mller細胞。培養(yǎng)的Mller細胞表達Nestin，不表達GFAP。 第三部分中間絲蛋白在不同視網(wǎng)膜病變中的表達

7、 目的：探討中間絲蛋白。Nestin和GFAP在不同視網(wǎng)膜病變中的表達，隨病情進展表達規(guī)律及其意義。 方法:制作青光眼、視神經(jīng)橫斷和缺氧三種視網(wǎng)膜損傷動物模型，分別于相應(yīng)時間點取材，從視網(wǎng)膜矢狀位切片和視網(wǎng)膜鋪片兩個方位行免疫熒光雙標探討Nestin和GFAP在視網(wǎng)膜中的定位，并用Western blotting和Real-time PCR方法進行定量檢測。 結(jié)果: 1、青光眼大鼠視網(wǎng)膜Mller細胞

8、出現(xiàn)Nestin和GFAP的誘導(dǎo)表達，隨病情進展其表達漸增強，并一直持續(xù)至術(shù)后3w。 2、視神經(jīng)橫斷大鼠視網(wǎng)膜Mller細胞出現(xiàn)Nestin和GFAP的誘導(dǎo)表達，隨病情進展其表達漸增強。 3、大鼠缺氧后視網(wǎng)膜Mllerr細胞出現(xiàn)Nestin和GFAP的誘導(dǎo)表達，立即給予高氧治療后，Nestin和GFAP在Mller細胞上的誘導(dǎo)表達明顯減弱，大鼠缺氧后星形膠質(zhì)細胞上也出現(xiàn)Nestin的誘導(dǎo)表達，但給