pcr技術

1、PCR1.生物學的聚合酶鏈式反應定義聚合酶鏈式反應簡稱PCR（英文全稱：PolymeraseChainReaction），聚合酶鏈式反應具體內容點擊：聚合酶鏈式反應，簡稱PCR。聚合酶鏈式反應，其英文PolymeaseChainReaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應組成一個周期循環(huán)進行使目的DNA得以迅速擴增具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。它不僅可用于基因分

2、離、克隆和核酸序列分析等基礎研究還可用于疾病病的診斷或任何有DNARNA的地方聚合酶鏈式反應（PolymeraseChainReaction，簡稱PCR）又稱無細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術。由美國科學家PE（PerkinElmer珀金埃爾默）公司遺傳部的Dr.Mullis發(fā)明，由于PCRPCR技術在理論和應用上的跨時代意義，因此Mullis獲得了1993年諾貝爾化學獎。技術原理DNA的半保留復制是生物進化和傳代

3、的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。在聚合酶鏈式反應間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；③引物的延伸：DNA模板引物結合物在TaqDNA聚合酶的作

4、用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈重復循環(huán)變性退火延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。反應體系與反應條件標準的PCR反應體系：10擴增緩沖液10ul4種dNTP混合物各200umolL引物各10～100pmol模板DNA0.1～2ugTaqD