花鱸Syntaxin4基因的克隆及表達特征.pdf

1、SNAREs是真核細胞的膜蛋白，參與分泌囊泡的胞內(nèi)運轉(zhuǎn)和囊泡與靶膜的融合過程，在細胞內(nèi)膜系統(tǒng)的囊泡膜和靶膜上均有分布。SNAREs蛋白家族的主要成員包括Syntaxin，SNAP-25和VAMP，三者相互作用時可形成7S復(fù)合體，介導(dǎo)囊泡膜與質(zhì)膜的融合，行使其功能。 Syntaxin4是SNARE家族成員之一，在吞噬和分泌中起重要作用。實驗中通過比較GenBank中不同Syntaxin4基因的同源相似性，設(shè)計出特異性引物，利用R

2、T-PCR方法克隆出該基因部分序列，再利用5'RACE和3'RACE技術(shù)克隆出花鱸Syntaxin4全長序列。該基因全長2444bp，其中開放閱讀框為897bp，編碼298個氨基酸。使用不同的生物學軟件和服務(wù)器對Syntaxin4基因進行同源性分析、二級結(jié)構(gòu)預(yù)測、跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測以及疏水性分析，確定Syntaxin4的功能作用位點。 利用實時定量PCR技術(shù)，分析Syntaxin4基因在mRNA水平上的相對表達量。結(jié)果表明，該基因在腦

3、組織和免疫相關(guān)組織中都有表達，以腦組織的表達量最多，在免疫相關(guān)組織中的表達量多少依次是脾臟、頭腎和血液。在LPS刺激24h后，脾臟和頭腎中的表達量分別是對照組的7．83倍和10．41倍，表明免疫組織中Syntaxin4的相對表達量隨誘導(dǎo)增強，重要細胞免疫因子TNFα和IL-1β在刺激后表達量的增加與Syntaxin4的變化趨勢是一致的。 使用免疫熒光組織化學方法，初步證實了Syntaxin4存在于花鱸巨噬細胞細胞膜上。通過免疫印