2302.花鰻鱺三個(gè)激素受體基因及hsp基因的克隆、鑒定及表達(dá)分析

1、摘要摘要花鰻鱺是降海洄游性魚類，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和市場(chǎng)開發(fā)前景，其幼鰻(鰻苗)須從海水遷移到淡水中生長(zhǎng)發(fā)育。目前對(duì)花鰻鱺滲透壓調(diào)節(jié)和免疫應(yīng)答方面的探索，已經(jīng)從細(xì)胞形態(tài)和病理檢測(cè)水平轉(zhuǎn)移到了分子機(jī)制水平的研究。但關(guān)于激素受體基因在洄游性魚類鹽度適應(yīng)調(diào)節(jié)方面的研究和熱休克蛋a(ifeashockproteins，HSP)在免疫應(yīng)答方面的報(bào)道還很少。精氨酸催產(chǎn)素受體(Argininevasotocinreceptors，AVTRs)和異亮氨

2、酸催產(chǎn)素受體(Isotocinrexeptor，ITR)屬于G蛋白偶聯(lián)受體(Gproteincoupledreceptor，GPCR)，它們與配體結(jié)合之后，激活耦合的G蛋白，并啟動(dòng)多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑產(chǎn)生多種生物學(xué)效應(yīng)，在滲透調(diào)節(jié)過程中扮演著重要角色。此外，HSP常作為分子伴侶識(shí)別多肽，抵御不利刺激，發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)功能。本文以花鰻鱺幼鰻為研究材料，初步探究AVTRs，ITR在不同鹽度環(huán)境下的表達(dá)變化規(guī)律和HSP感染嗜水氣單胞茵后的表達(dá)變化模式

3、。具體研究結(jié)果如下：1花鰻鱺AVTRs和ITR基因的克隆、鑒定與表達(dá)分析采用RACE技術(shù)，首次克隆了花鰻鱺AVTRVla2、AVTRV2和ITR基因的cDNA全長(zhǎng)，其中三者全長(zhǎng)分別為3049bp、2101bp和2191bp：分別包括1260bp開放閱讀框(ORF)編碼419個(gè)氨基酸，1656bp個(gè)ORF編碼551個(gè)氨基酸以及113lbp個(gè)ORF編碼376個(gè)氨基酸：5’UTR區(qū)和37UTR區(qū)分別為237bp和1552bp、158bp和28

4、7bp、69bp和1060bp；DNAstar軟件預(yù)測(cè)它們的分子量分別為47784KD、59884KD和42970KD，等電點(diǎn)分別為8664、8705和9292；氨基酸序列分析結(jié)果表明每個(gè)受體都含有G蛋白偶聯(lián)受體所特有的七次跨膜結(jié)構(gòu)域。通過多重比較和系統(tǒng)進(jìn)化樹分析，發(fā)現(xiàn)花鰻鱺AVTRVla2、AVTRV2和ITR基因在魚類中高度保守。運(yùn)用熒光定量PCR技術(shù)，檢測(cè)花鰻鱺AVTRVla2、AVTRV2和ITR基因在腦、鰓、腸、肝臟、脾、腎臟

5、、肌肉和心臟8種組織中廣泛分布，不同基因間有組織特異性。選取鹽度0、鹽度10(Brackishwater，BW)矛N鹽度25(Seawater，sw)的花鰻鱺腦、鰓、腸三種組織進(jìn)行分析，結(jié)果AVTRVla2、AVTRV2和ITR基因的mRNA均發(fā)生顯著差異表達(dá)變化(P005)。通過蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)，檢測(cè)腦組織中AVTRVIa2蛋白的表達(dá)量，結(jié)果表明它在BW組呈先升高后降低趨勢(shì)，SW組顯著下調(diào)。此外，在鰓組織中，探究了三個(gè)受體基因分別和