光皮樺成花相關(guān)SPL基因的克隆、表達及功能分析.pdf

1、SBP-box基因家族是植物特有的一個轉(zhuǎn)錄因子基因家族，廣泛存在于綠色植物中，在成花過程中起關(guān)鍵的調(diào)控作用。本研究以珍貴用材樹種光皮樺為材料，采用RACE的方法，克隆獲得光皮樺的13個SPL基因，通過生物信息學、亞細胞定位、熒光定量PCR分析和酵母雙雜交等手段，對其進行了功能分析，獲得以下主要結(jié)果。
　　1.序列分析結(jié)果顯示，BlSPL5的ORF最長，達到3249bp，編碼1082個氨基酸；BlSPL3的ORF最短，僅為450bp

2、，編碼149個氨基酸；在這些光皮樺SPL轉(zhuǎn)錄因子的N端均具有一個保守的SBP結(jié)構(gòu)域，僅在BlSPL4、BlSPL5和BlSPL12的C端含有一個較保守的ANK結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進化分析結(jié)果顯示，這13個BlSPLs分別屬于陸地植物SPL基因的8個不同分支。
　　2.采用RLM-RACE的方法，對BlSPL1、3、6、7、8、9和11的miR156/157剪切位點進行了驗證。結(jié)果顯示，除BlSPL8的剪切位點在miR156/157的11/

3、12位外，其余BlSPLs的剪切位點均在10/11位，說明它們的剪切模式有比較強的一致性；而在剪切發(fā)生的位點，除BlSPL9外其余SPL基因均有1個堿基miR156/157錯配。
　　3.利用洋蔥表皮細胞對部分BlSPL基因進行了亞細胞定位分析，結(jié)果顯示，miR156靶標的BlSPL1和3均定位于細胞核，符合轉(zhuǎn)錄因子的定位特征。
　　4.熒光定量PCR分析結(jié)果表明，BlSPL1、2、5、11、13在雄花序中高表達，推測它們與