太行花MADS-box基因的克隆及其表達(dá)分析.pdf

1、植物的成花發(fā)育是由一類同源異型基因調(diào)控的,這類基因多具有MADS-box結(jié)構(gòu),因此又稱之為MADS-box基因.MADS-box基因編碼的轉(zhuǎn)錄因子可分為四個(gè)明顯的區(qū)域,即M區(qū)、I區(qū)、K區(qū)和C區(qū).其中M區(qū)(MADS-box)具有高度的保守性,我們根據(jù)此區(qū)域的保守序列設(shè)計(jì)簡并性引物,利用RACE的方法從太行花花芽中克隆到了兩個(gè)MADS-box基因THMADS1和THMADS2.分別以THMADS1不含MADS-box的區(qū)段和THMADS2中

2、比THMADS1長出的約300bp片段作模板,用地高辛標(biāo)記合成反義RNA探針,以各時(shí)期花芽(高溫處理和正常溫度條件下)石蠟切片為材料進(jìn)行原位雜交,以確定這兩個(gè)基因的精確表達(dá)模式.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明兩探針雜交得到的結(jié)果相同,兩基因在未經(jīng)高溫處理的花原基就有表達(dá),到花器官原基出現(xiàn)的時(shí)期,僅集中在雌、雄蕊中表達(dá).在高溫處理過的材料中,這兩個(gè)基因的表達(dá)模式與未經(jīng)高溫處理的花芽是一致的,但基因表達(dá)量明顯低于未經(jīng)高溫處理的花芽,說明這兩個(gè)基因在花原基分化