重組IBDV Vp2蛋白的制備與免疫保護試驗.pdf

1、傳染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease，IBD)是引起我國及世界養(yǎng)禽業(yè)經(jīng)濟損失嚴重的主要傳染病之一。目前，使用的常規(guī)弱毒疫苗和滅活疫苗的安全性和制造工藝存在缺陷，而為預(yù)防變異毒株采用的中強毒力活疫苗存在著較大的生物安全問題。因此，在當(dāng)前IBD防控工作中，亟需免疫效力強、生物安全性高，并且針對當(dāng)前流行毒株的新型IBD基因工程疫苗的問世。本試驗內(nèi)容包括兩個部分:
　　 試驗1:重組IBDV Vp2蛋白的制

2、備
　　 將本實驗室前期構(gòu)建的高效表達IBDV Vp2的重組桿狀病毒vBacA-Vp2(P3代)接種Sf9昆蟲細胞，用間接免疫熒光試驗(IFA)檢測，出現(xiàn)特異性熒光;用IBDV抗體夾心ELISA檢測，呈陽性反應(yīng);用Western-blotting分析，在53 ku處有一條特異蛋白條帶;電鏡觀察，重組Vp2蛋白能組裝成病毒樣顆粒。優(yōu)化重組Vp2蛋白的表達條件，在感染前一天預(yù)鋪Sf9細胞，待細胞密度達90％時，接種不同接毒量的vBa

3、cA-Vp2，分別于72、96和120 h收集細胞培養(yǎng)物，用IBDV雙抗體夾心ELISA測定細胞培養(yǎng)物效價。結(jié)果表明接種vBacA-Vp2的接毒量為0.01，表達時間為72 h，收集的細胞培養(yǎng)物中重組Vp2蛋白含量最高，抗原效價達3.2×103。用優(yōu)化的重組Vp2蛋白表達條件，接種vBacA-Vp2，收集細胞培養(yǎng)物，大量制備重組Vp2蛋白，為研制新型高效IBD病毒樣顆?；蚬こ桃呙缰苽淇乖?。
　　 試驗2:重組IBDV Vp2蛋

4、白的免疫保護試驗
　　 將重組桿狀病毒vBacA-Vp2感染的昆蟲細胞裂解物分別與ISA206、ISA50和白油三種佐劑乳化制成抗原，免疫2周齡SPF雞，一次免疫14 d后，ELISA方法檢測抗體效價，結(jié)果ISA206和IBDV B87株免疫組之間無顯著差異(P＞0.05)，但均顯著高于其他組（ISA50、白油和空白對照組）（P＜0.01），細胞中和試驗測定，ISA206組中和抗體效價顯著高于其它4組（B87、ISA50、白油和

5、空白對照組）(P＜0.01);二次免疫14 d后，ELISA方法檢測抗體效價，結(jié)果ISA206組顯著高于其他組（B87、ISA50、白油和空白對照組）（P＜0.01），而白油、ISA50和B87株免疫組之間沒有顯著性差異（P＞0.05），細胞中和試驗測定，ISA206組中和抗體效價顯著高于其它4組（B87、ISA50、白油和空白對照組）(P＜0.01);用IBDV AH1強毒株對各免疫保護組進行攻毒試驗，ISA206、白油和B87株免疫