PPV VP2基因與PCV2 ORF2不同抗原優(yōu)勢區(qū)重組真核表達質粒的構建及其免疫效果研究.pdf

1、為了研究豬細小病毒VP2基因和豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因的不同抗原優(yōu)勢區(qū)重組真核表達質粒的免疫原性和在免疫動物體內的分布及安全性，分別以PPV SC-1株和PCV2 SC株為模板，擴增了PPV VP2基因和PCV2 ORF2上不同抗原優(yōu)勢區(qū)基因A、B、C(A:117～131aa、B:157～183aa、C:165～200aa)。將A、B、C抗原基因分別與PPV VP2基因串聯，并插入pCI-neo真核表達載體，構建了能同時表達PPV V

2、P2蛋白和PCV2 Cap蛋白的重組質粒pCI-A-VP2、pCI-B-VP2、pCI-C-VP2。將各重組真核表達質粒轉染Vero細胞，用間接免疫熒光試驗檢測表達產物的免疫學活性；并以小鼠為動物模型，分別將豬細小病毒滅活疫苗、豬圓環(huán)病毒亞單位疫苗、pCI-neo空載體和3種重組真核表達質粒pCI-A-VP2、pCI-B-VP2、pCI-C-VP2通過肌注進行免疫，相同劑量免疫2次，間隔2周。采用MTT比色法、流式細胞術和ELISA法檢

3、測了免疫小鼠脾臟淋巴細胞的轉化功能，外周血中CD4+和CD8+淋巴細胞比例，PCV2和PPV IgG抗體效價。并且為了研究各重組質粒在免疫動物體內的分布和安全性，采集了不同時期免疫小鼠的心、肺、肝、腎及肌肉組織進行基因組DNA的抽提和PCR擴增。結果顯示，3種重組真核表達質粒轉染Vero細胞48h后，間接免疫熒光試驗都能檢測到較強的免疫熒光；3種重組質粒免疫小鼠后第7天起，免疫小鼠脾臟淋巴細胞的增殖活性，外周血CD4+、CD8+T淋巴細

4、胞比例和抗PCV2、PPV的IgG抗體效價都顯著(P＜0.05)或極顯著(P＜0.01)高于空載體對照組，且免疫效率pCI-C-VP2組最高，pCI-A-VP2組最低；重組質粒免疫小鼠后7～49d在各器官具有廣泛的分布，第56d開始只能在心臟及肌肉組織擴增出目的基因片段，其它組織PCR結果全為陰性。而7～56d采集的不同組織樣品純化基因組DNA的PCR實驗結果都為陰性。證實所構建的重組真核表達質粒均能在細胞中正常表達；能夠誘導免疫小鼠產