雞miR-1704靶基因的初步鑒定及生物學功能研究.pdf

1、MicroRNAs是內(nèi)源性的非編碼小RNA分子，通過結合到靶基因mRNA的3'UTR，從而在轉錄后水平負調(diào)控基因的表達，參與機體內(nèi)許多重要的生物過程。前人在雞胚中發(fā)現(xiàn)miR-1704，但有關其功能的研究尚未見報道。本研究利用熒光定量PCR技術檢測了miR-1704在固始雞1日齡、6周齡和16周齡的9種不同組織中的表達情況;利用TargetScan在線軟件預測了m iR-1704的靶基因，對預測的靶基因在基因功能注釋數(shù)據(jù)庫DAVID和GO

2、Term Finder進行了 GO富集和KEGG通路分析，并通過雙熒光報告系統(tǒng)初步鑒定了 miR-1704的靶基因;以實驗室固始雞-安卡雞F2代資源群體為試驗素材，分析了miR-1704單核苷酸多態(tài)性與資源群體經(jīng)濟性狀間的關聯(lián)性，并通過構建miR-1704多態(tài)位點不同等位基因的真核表達載體對其功能進行了探索。主要結果如下:
　　1.雞miR-1704在所檢測的組織中呈廣泛性表達，且在不同時期及不同組織間差異性表達。MiR-1704

3、在1日齡和6周齡時低豐度表達，在16周齡時高豐度表達。1日齡時，miR-1704在腿肌、下丘腦和肝臟中的表達量較高，在腎臟和大腦中的表達量較低;6周齡時，miR-1704在各組織中的表達量均較低;16周齡時，miR-1704在脾臟、腿肌和下丘腦中的表達量較高，在小腸中的表達量最低。
　　2.TargetScan預測得到miR-1704的靶基因173個。GO富集和KEGG通路分析結果表明，miR-1704靶基因顯著富集于基因表達調(diào)控

4、、生物合成、物質(zhì)代謝、生物過程調(diào)節(jié)等生物學過程，以及細胞周期、鈣信號通路和Hedgehog信號通路。利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)驗證miR-1704與預測靶基因BMP2和IRS2的靶標關系，初步證實BMP2和IRS2是miR-1704的靶基因。
　　3.對miR-1704多態(tài)位點rs14668705 C＞G的關聯(lián)分析結果表明，該突變與雞出生重、6周體重、8周體重、10周體重、12周體重、4周脛圍、8周脛圍、12周脛圍、屠體重、半凈膛重、

5、腿肌失水率、胸肌pH和谷草轉氨酶顯著相關(P＜0.05)，且除胸肌pH值外，各性狀CC型和GC型個體表型均值大于GG型。C＞G位點不同等位基因的表達研究表明，該突變顯著影響成熟miR-1704的表達(P＜0.05)。
　　由以上試驗結果，可得出如下結論:
　　1.miR-1704在雞不同時期不同組織中廣泛性、差異性表達。
　　2.初步證實BMP2、IRS2是miR-1704的靶基因。
　　3.miR-1704前體