mir-260靶基因鑒定實驗研究及動力學(xué)模型.pdf

1、microRNA(miRNA)是廣泛存在于細(xì)胞中的一類最小的功能非編碼RNA(non-coding RNA，ncRNA)。其生物學(xué)功能，主要表現(xiàn)為對靶基因(主要是信使RNA，mRNA)的調(diào)控。確定miRNA靶基因的方法有分子生物實驗和信息學(xué)分析兩種。實驗方法是研究miRNA調(diào)控后mRNA的水平及其蛋白變化;生物信息學(xué)方法則是依據(jù)已被實驗證實的miRNA與其靶基因序列之間的相互作用規(guī)律設(shè)計成的軟件進(jìn)行大數(shù)據(jù)分析，在基因庫中尋找miRNA的

2、可能調(diào)控的目的基因。
　　實驗研究表明:mir-260突變體能夠加快秀麗隱桿線蟲的衰老進(jìn)程。可能的分子機(jī)制是mir-260通過間接影響基因jnk-1、eat-2的表達(dá)量來調(diào)控線蟲的衰老進(jìn)程。本文以mir-260為研究對象，以生物信息學(xué)預(yù)測和分子實驗檢測相結(jié)合的方法，研究mir-260對與衰老相關(guān)基因的直接調(diào)控。并結(jié)合實驗數(shù)據(jù)，改進(jìn)了基因調(diào)控的動力學(xué)模型。主要工作如下:
　　在實驗上，利用生物信息學(xué)方法(mircoRNA、mi

3、rSOM)預(yù)測mir-260的靶基因，并篩選出其中5個已報道與壽命有關(guān)的基因:coq-2、nuo-4、rps-10、tps-1、atp-3。進(jìn)行分子實驗，構(gòu)建含有mir-260和上述靶基因的質(zhì)粒，并將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞，再利用雙熒光素酶報告基因方法檢測5個靶基因的熒光蛋白在不同時間的表達(dá)量。實驗結(jié)果表明:1，coq-2、nuo-4、rps-10、tps-1、atp-3是mir-260靶基因;2，mir-260對靶基因的調(diào)控在轉(zhuǎn)染