Mterfd2的表達(dá)調(diào)控機(jī)制及生物學(xué)功能的初步研究.pdf

1、在對小鼠胚胎發(fā)育12.5天（E12.5天）的孤雌胚胎和正常胚胎的高通量基因芯片檢測中，發(fā)現(xiàn)了若干差異表達(dá)基因，其中包括本課題研究的基因MTERF domain containing2（Mterfd2，又稱MTERF4）。關(guān)于該基因表達(dá)模式的詳細(xì)研究目前未見報道，因此本課題著重分析了該基因的表達(dá)模式及其蛋白質(zhì)在細(xì)胞中的定位，并初步探討了其調(diào)控機(jī)制和生物學(xué)功能，為進(jìn)一步深入研究該基因的功能奠定了基礎(chǔ)。
　　本課題首先通過一系列生物信息

2、學(xué)檢索，查閱并報告了該基因的基本信息，該基因位于1號染色體，基因組全長6.7Kb，是一個編碼基因，其蛋白產(chǎn)物Mterfd2隸屬于線粒體轉(zhuǎn)錄終止因子家族(Mitochondria Transcription Termination Factor Family, MTERF)并且在哺乳動物中高度保守。本課題以pEGFP-N1為載體，構(gòu)建了Mterfd2-EGFP融合蛋白，通過免疫細(xì)胞化學(xué)的方法，證實(shí)Mterfd2蛋白定位于線粒體中。該基因雖

3、然與母系遺傳的線粒體相關(guān)，但是通過基于單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(Single Nucleotide Polymorphism, SNP)的直接測序結(jié)果表明，Mterfd2基因在E15.5天小鼠胚胎的腦、舌、心臟、肺臟、肝臟和腎臟中呈現(xiàn)雙等位表達(dá)的模式。此外，課題采用原位雜交(in situ Hybridization, ISH)，定量PCR(Quantitative Real Time PCR),Northern blot分析等多種實(shí)驗(yàn)方法，