豬帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TSOL18基因重組犬腺病毒2型活載體疫苗的基礎(chǔ)研究.pdf

1、囊蟲(chóng)病(CysticercosisCellulosae)是由豬帶絳蟲(chóng)(Taeniasolium)的幼蟲(chóng)寄生于人或豬體內(nèi)而引起的一種重要人畜共患寄生蟲(chóng)病。人不僅是中間宿主，而且是唯一的終末宿主。腺病毒載體是基因工程疫苗研究中重要的轉(zhuǎn)基因病毒載體，研究和開(kāi)發(fā)基于腺病毒的重組豬囊尾蚴疫苗，將對(duì)控制或根除豬囊尾蚴病具有實(shí)踐意義。 以質(zhì)粒pVAX1為載體構(gòu)建了豬囊蟲(chóng)病基因免疫用的真核表達(dá)質(zhì)粒。首先根據(jù)kozak原理設(shè)計(jì)了1對(duì)表達(dá)引物，用P

2、CR方法從構(gòu)建好的重組質(zhì)粒pGEM-TSOL18中擴(kuò)增出豬帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TSOL18基因片段，將其定向克隆到質(zhì)粒pVAX1中得到真核表達(dá)質(zhì)粒pV-TSOL18。再根據(jù)PCR點(diǎn)突變?cè)碓O(shè)計(jì)4條突變引物，對(duì)目的基因進(jìn)行改造，之后亞克隆入pVAX1載體中獲得含改造后的目的基因的重組表達(dá)質(zhì)粒pV-TSOL18m。經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞36h后用RT-PCR方法檢測(cè)到了目的基因的轉(zhuǎn)錄。這為豬囊蟲(chóng)病基因疫苗動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)研究奠定了良好基礎(chǔ)。

3、構(gòu)建了能表達(dá)豬帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TSOL18蛋白的重組犬2型腺病毒CAV2-TSOL18m。首先用SspⅠ對(duì)重組質(zhì)粒pVAXE3的E3區(qū)中859bp長(zhǎng)度的片段進(jìn)行缺失，得到含有CAV-2E3區(qū)的穿梭質(zhì)粒pVAX△E3。將所構(gòu)建的真核表達(dá)質(zhì)粒pV-TSOL18m用NdeⅠ+SphⅠ雙酶切，然后將含有TSOL18m基因的完整表達(dá)盒(pCMV-TSOL18m-PolyA)進(jìn)一步定向克隆到pVAX△E3中，構(gòu)建出p△E3-TSOL18m。通過(guò)NruⅠ