布地奈德干預(yù)對(duì)哮喘小鼠肺組織中IL-17和RORγt mRNA表達(dá)水平的影響.pdf

1、目的：通過(guò)研究哮喘模型外周血中Th17細(xì)胞百分率及肺泡灌洗液中IL-17水平、肺組織RORγt mRNA表達(dá)水平，以及給予布地奈德干預(yù)治療后的影響，來(lái)探討支氣管哮喘的發(fā)病和治療機(jī)制。
　　方法：健康雌性Ba1b/c純系小鼠(徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)30只，6-8周齡，體重22-24g，普通級(jí)，按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組(每組10只)：(1)模型組及BUD治療組：均于第0、7、14天給予OVA/Al(OH)3混合液0.2ml(內(nèi)含O

2、VA100μg，Al(OH)31mg)腹腔注射(i.p.，intraperitoneal)，第2l-26天每天將小鼠置于5L密閉容器中以2％的OVA生理鹽水(NS，normal saline)溶液10ml霧化吸入激發(fā)30min或出現(xiàn)哮喘樣發(fā)作為止。另外，治療組于第0、1、7天及每次霧化前給予布地奈德霧化液5ml(含BUDlmg)，每次30min。(2)對(duì)照組則在致敏階段以Al(OH)3替代OVA/Al(OH)3腹腔注射，在激發(fā)階段以NS

3、替代OVA霧化。各組于最后一次激發(fā)24h，即第27天處死動(dòng)物進(jìn)行各項(xiàng)檢測(cè)。采用HE染色評(píng)價(jià)各組小鼠氣道炎癥程度；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)各組小鼠外周血中Th17細(xì)胞數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)技術(shù)檢測(cè)小鼠肺泡灌洗液(BALF)、血清中白細(xì)胞介素-17(IL-17)水平；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)肺組織RORγtmRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.小鼠臨床表現(xiàn)及肺組織病理改變：模型組小鼠出現(xiàn)了煩躁不安

4、，頭面部抓撓，鼻扇，呼吸急促，前肢縮抬，反應(yīng)遲鈍，步態(tài)不穩(wěn)，蛙跳等典型哮喘表現(xiàn)，嚴(yán)重者呼吸減慢或呼吸節(jié)律不整，口鼻輕度紫紺，四肢癱軟，行動(dòng)遲滯或俯伏不動(dòng)；連續(xù)激發(fā)后小鼠毛色失去光澤，取出動(dòng)物可見(jiàn)遺留較多排泄物。治療組小鼠癥狀表現(xiàn)較輕，24小時(shí)內(nèi)精神，毛發(fā)，食欲均可獲得不同程度上的恢復(fù)；對(duì)照組小鼠一般情況良好。光鏡下，哮喘組小鼠肺泡間隔增寬，支氣管管腔變小，管壁增厚，小血管及細(xì)支氣管周?chē)梢?jiàn)到大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；BUD治療組病理改變較模型組

5、輕；對(duì)照組小鼠細(xì)支氣管及肺泡結(jié)構(gòu)基本正常，無(wú)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。2.小鼠外周血Th17細(xì)胞的百分率、占CD4+T細(xì)胞比例：模型組(5.09％±1.01％、22.66％±3.65％)明顯高于正常對(duì)照組(2.19%±0.21％、7.90%±0.61％)，均為P<0.01；BUD治療組(3.47％±0.77％、14.26±3.28％)比模型組降低，均為P<0.01。3.小鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)中IL-17水平：模型組較對(duì)照組明顯增高(2

6、7.28±3.64pg/ml vs6.58±2.32 pg/ml，19.51±2.23 pg/ml vs5.49±2.62 pg/ml均為P<0.01)，BUD治療組較模型組降低(12.04±2.28pg/ml vs27.28±3.64 pg/ml，9.82±1.94 pg/ml vs19.51±2.23 pg/ml，均為P<0.01)。4.小鼠肺組織中RORγt-actinmRNA比例：模型組(0.814±0.07)較對(duì)照組(0.33