PAMAM-D納米微球介導hTERT siRNA靶向治療口腔鱗癌的實驗研究.pdf

1、Y767906p婁號R7390UD(1616j11岔m：般％00211121024咿幽撼毋博士學位論文PAMAMD蚋米微球介導hTERTsiRNA靶向治療口腔鱗癌的實驗研究學位申請^：一#”0a職稱業(yè)0稱劉習強黃洪童教授腫指學(polyamidoaminedendrimer，PAMAMD)納米微球介導增強型綠色熒光蛋白(enhancedgreenfluorescentproteinEGFP)基因轉染人舌鱗癌細胞優(yōu)化轉染方案：在此基礎上，

2、嘗試以hTERT基因為靶點，利用目前較為先進的RNA干擾(RNAinterferenceRNAi)技術構建多條靶向hTERT基因的小干擾RNA(smallinterferingRNAsiRNA)表達框架(siRNAexpressioncassettesSECs)，并利用PAMAMD納米載體在優(yōu)化條件下篩選出最有效的siRNA靶序列；進一步構建siRNA表達載體進行體內外系列實驗并對hTERT表達調控及基因沉默誘導細胞凋亡機制進行初步探討

3、，旨在探索將RNAi和納米基因轉移技術有機結合治療舌鱗癌的可行性，從而為口腔癌以及其他腫瘤的治療提供新途徑。第一部分PAMAMD納米載體表征及其轉染效率影響因素的分析選擇合適的基因轉移載體將目的基因安全高效地導入細胞，是基因治療成功的關鍵。從目前發(fā)展趨勢來看，陽離子聚合物載體在基因轉移方面呈現顯著優(yōu)勢，其中PAMAMD納米載體以其優(yōu)越的理化性能和較理想的基因轉移能力而日益受到重視。研究證明，PAMAMD可以高效介導基因和／或藥物轉染多種

4、腫瘤細胞株和原代培養(yǎng)細胞，并且具有緩釋、安全無毒等優(yōu)點。由于受多種條件參數的影響，PAMAMD的最佳轉染效率在不同類型細胞中差異較大。本研究利用增強型綠色熒光蛋白(EGFP)真核表達質粒作為報告基因，選擇第二、第五和熱降解型PAMAMD(SuperFect)作為基因轉移載體，并以脂質體LipofectamineTM2000為對照制冬轉染復合物。應用透射電鏡、動態(tài)激光散射和電位分析儀等測定各載體表征；抗核酸酶試驗檢測載體對基因的保護能力；