HPV融合蛋白疫苗治療口腔鱗癌的實驗研究.pdf

1、目的：口腔鱗狀細胞癌(Oral squamous cell carcinoma，OSCC)是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤，治療以手術、放療和化療為主，但生存率仍無明顯提高。研究發(fā)現(xiàn)人乳頭狀瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染與口腔癌發(fā)生有關。HPVE6和E7癌蛋白在腫瘤細胞中的表達為免疫治療提供了良好的靶抗原。研發(fā)HPVE6/E7融合蛋白疫苗為治療HPV相關口腔鱗癌提供了新的方法。課題組通過轉(zhuǎn)染HPV16E6/E

2、7基因至口腔黏膜正常上皮細胞，再經(jīng)致癌劑誘導至體外口腔鱗癌模型。本研究旨在該模型基礎上，探討融合蛋白疫苗治療實驗性口腔鱗癌的療效，并研究其可能機制。 方法：首先通過多次裸鼠移植和原代培養(yǎng)的方法優(yōu)化實驗性口腔鱗癌細胞模型。運用細胞形態(tài)學、免疫熒光、生長曲線、細胞周期檢測和裸鼠體內(nèi)成瘤等方法檢測第二代HB(HIOEC-BaP)細胞的生物學特性。其次通過腹腔注射人淋巴細胞和皮下接種HB-2細胞建立重建人免疫功能荷瘤NOD/SCID鼠模

3、型，應用組織學、流式細胞儀和ELISA等方法檢測人免疫功能在NOD/SCID鼠體內(nèi)的重建情況和腫瘤差異。最后，在以上細胞模型和免疫重建模型基礎上，通過腫瘤生長曲線、流式細胞學、免疫組化、細胞毒細胞殺傷(cytotoxic T lymphocyte，CTL)觀察疫苗治療效果和機制。 結(jié)果：從HB96細胞篩選到高成瘤性HB-2細胞。HB-2形態(tài)上表現(xiàn)為核漿比例增大，可見多核巨細胞，核分裂相多見，體外增殖快于HB96，裸鼠體內(nèi)成瘤率和

4、腫瘤體積均高于HB96。重建了人免疫功能的NOD/SCID鼠模型，人化荷瘤組脾重和外周血人CD3+、CD3+CD8+淋巴細胞均高于單純荷瘤組。免疫組化顯示脾臟內(nèi)可見人淋巴細胞抗原表達陽性。但兩組腫瘤體積和瘤重無明顯差異。融合蛋白疫苗治療免疫重建荷瘤NOD/SCID鼠模型顯示，腫瘤體積在接種腫瘤后第27天疫苗組較無疫苗組明顯縮小，外周血和脾臟中均檢測到人淋巴細胞的存在。不同效靶比時，CTL殺傷效率疫苗組均高于無疫苗組，效靶比為20:1，殺