去甲基化制劑誘導(dǎo)HepG2肝癌細(xì)胞RUNX3基因表達(dá)及對(duì)生物學(xué)行為和藥物敏感性的影響.pdf

1、目的：RUNX3(PEBP2aC/CBFA3/AML2)為新近克隆的一個(gè)候選抑癌基因。研究表明該基因在人類多種腫瘤中存在甲基化異常，而肝癌中該基因的表達(dá)情況尚處于探索階段。本研究觀察去甲基化制劑5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine，5-Aza-CdR)誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞系HepG2因高甲基化失活的RUNX3基因的再表達(dá)及對(duì)該腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為和藥物敏感性的影響。 方法：以不表達(dá)RUNX3基因的人肝癌

2、細(xì)胞系HepG2為靶細(xì)胞，分為不加任何處理的對(duì)照組和5-Aza-CdR處理組。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)抑癌基因RUNX3 mRNA表達(dá)水平的改變；MTT比色法觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)活性及對(duì)化療藥物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)和阿霉素(adriamycin，ADM)IC<,50>值的影響；平板克隆試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)的敏感性；流式細(xì)胞儀(FCM)測(cè)定細(xì)

3、胞周期及阿霉素(adriamycin，ADM)累積率；透射電鏡觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)果：對(duì)照組HepG2細(xì)胞未能檢RUNX3基因mRNA表達(dá)，而經(jīng)0.1、5.0gmol/L5-Aza-CdR處理后，RUNX3 mRNA可見再表達(dá)。5-Aza-CdR可時(shí)間、濃度依賴性地抑制HepG2細(xì)胞增殖(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)(γ)別為γ 24h=0.894，γ 48h=0.973，γ 72h=0.967，24、48和 72 h的I

4、C<,50>分別為87.5、84.7和59.0μmol/L。經(jīng)5-Aza-CdR處理后，電鏡顯示HepG2細(xì)胞為早期凋亡形態(tài)學(xué)改變。分別采用為5.0和10.0μmol/L濃度的5-Aza-CdR處理HepG2細(xì)胞72 h，與對(duì)照組相比，其S期細(xì)胞增多，而G<,1>期細(xì)胞減少，提示細(xì)胞發(fā)生S期阻滯。MTT試驗(yàn)顯示5-Aza-CdR處理組細(xì)胞5-FU及阿霉素的IC<,50>比對(duì)照組明顯降低(P<0.05)，且前者的胞內(nèi)阿霉索熒光強(qiáng)度顯著高于