原發(fā)性肝癌GPC3的表達與術后早期復發(fā)關系的研究.pdf

1、1. 目的：明確與原發(fā)性肝細胞癌（肝癌）根治性切除術后早期復發(fā)密切相關的臨床病理危險因素，探討GPC3（磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3)表達與肝癌術后高危復發(fā)的關系。
　　 2. 方法：回顧性分析廣東省人民醫(yī)院肝膽外科自2003年1 月至2007年1 月收治住院、并接受根治手術、術后病理證實為原發(fā)性肝細胞癌患者的臨床病理資料，隨訪日期截止2009年1 月，隨訪終點為腫瘤復發(fā)。根據腫瘤復發(fā)時間將患者分為早期復發(fā)組及非早期復發(fā)組。早期復發(fā)指

2、腫瘤肝內復發(fā)時間在術后一年以內；非早期復發(fā)指術后隨訪2年內未見腫瘤復發(fā)或轉移。共有57例患者入選本研究，其中早期復發(fā)組29例，非早期復發(fā)組28例；分析比較兩組患者的各項臨床病理資料，包括11 項一般臨床因素（性別、年齡、HbsAg、HbeAg、HCV、HBVDNA、Child分級、AFP、ALT、肝硬化，圍手術期輸血）及8 項腫瘤因素（腫瘤直徑、腫瘤數(shù)目、衛(wèi)星結節(jié)、淋巴結轉移、微血管侵犯、門靜脈侵犯、包膜侵犯、Edmonson分級）；通

3、過單因素分析，明確與肝癌早期復發(fā)相關的臨床病理危險因素。
　　 我們前期研究工作利用Affymetrix U133 plus 2.0 芯片在全基因組范圍內比較了10例術后1年內復發(fā)及10例術后超過2年未復發(fā)的兩組肝癌患者基因表達譜的差異，發(fā)現(xiàn)GPC3基因在早期復發(fā)組中表達明顯上調，接近4 倍,這提示其表達上調可導致肝癌細胞的侵襲性顯著增強、與肝癌早期復發(fā)密切相關。本研究采用實時熒光定量RT-PCR 法（real time RT-

4、PCR）和免疫組化法，分別在mRNA和蛋白質水平驗證GPC3 在早期復發(fā)組和非早期復發(fā)組患者肝癌組織中的差異表達。
　　 將GPC3陽性表達作為候選危險因素，與單因素分析顯示的與肝癌早期復發(fā)相關的臨床病理危險因素一起，進入logistic 多元回歸分析，明確與肝癌早期復發(fā)密切相關的獨立危險因素。采用SPSS13.0 統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料采用卡方檢驗，計量資料采用兩個獨立樣本t檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義

5、。
　　 3. 結果：
　　 3.1. 早期復發(fā)相關臨床病理危險因素的單因素分析
　　 單因素分析顯示早期復發(fā)組與非早期復發(fā)組比較有四項指標差異有顯著性，分別是：合并肝硬化（P=0.022）、腫瘤直徑大于5cm（P=0.000）、存在腫瘤微血管侵犯（P=0.022）和術前ALT 水平升高超過兩倍（P=0.003），這些指標可能與肝癌術后早期復發(fā)密切相關。
　　 3.2. 實時熒光定量 RT-PCR 法檢測

6、GPC3 在肝癌細胞中的表達
　　 實時熒光定量 RT-PCR 法示早期復發(fā)組中GPC3 相對表達量為(3.977±0.676)，非早期復發(fā)組為(3.503±0.926)，早期復發(fā)組中GPC3的相對表達量高于非早期復發(fā)組，其差異有統(tǒng)計學意義（t=2.213，P=0.031）。
　　 3.3. 免疫組化法檢測GPC3 在肝癌細胞中的表達
　　 在正常肝組織中GPC3 呈陰性表達；57例肝癌標本中，GPC3 表達總陽

7、性率為68.42%（39/57）。在早期復發(fā)組中，GPC3陽性表達率為82.76%（24/29），而非早期復發(fā)組中GPC3陽性表達率只有53.57%（15/28），差異具有統(tǒng)計學意義（? 2=5.617，P＜0.05）。GPC3 蛋白表達與肝癌的一般臨床因素和腫瘤因素無關(P>0.05)。
　　 3.4. 肝癌根治性切除術后早期復發(fā)密切相關的獨立危險因素
　　 合并肝硬化、腫瘤直徑大于5cm、存在腫瘤微血管侵犯、術前AL

8、T 水平升高超過兩倍，和GPC3陽性表達這五項候選危險因素一起進入logistic 多元回歸分析，結果顯示僅GPC3陽性表達、合并肝硬化以及存在腫瘤微血管侵犯是與肝癌根治性切除術后早期復發(fā)密切相關的獨立危險因素。GPC3陽性表達的回歸系數(shù)為1.961（P=0.034 ）， OR 值為7.110（95%CI:1.158~43.639）；腫瘤直徑大于5cm的回歸系數(shù)為為2.100（P=0.011），OR 值為8.170（95%CI:1.62