葛根素對于體外培養(yǎng)成骨細胞OPG-RANKL基因系統(tǒng)表達的影響.pdf

1、葛根素是從中藥葛根中提取出的一種化學(xué)物質(zhì)，臨床研究發(fā)現(xiàn)，葛根素具有治療骨質(zhì)疏松癥的作用。實驗表明，葛根素治療骨質(zhì)疏松癥的其中之一機理，為其促進成骨細胞的增殖和分化作用相關(guān)，但是其具體的分子機制尚不明確，需要通過進一步研究來進行探討。
　　 目的：通過實驗來探討葛根素治療骨質(zhì)疏松癥的分子機制。
　　 研究方法：取新生24小時的SD大鼠頭蓋骨，使用0.1％Ⅱ型膠原酶消化法分離出成骨細胞，取第四代成骨細胞進行實驗，使用堿性磷酸

2、酶染色法以及形態(tài)學(xué)法鑒定成骨細胞，堿性磷酸酶比色法檢測葛根素對促成骨細胞分化能力的影響，通過MTT法檢測不同濃度、不同時間葛根素藥液對成骨細胞增殖能力的影響，按照MTT法檢測的最佳葛根素藥物濃度和作用時間，作用成骨細胞，RealtimePCR法檢測其OPG/RANKL基因轉(zhuǎn)錄，WesternBlot法，檢測其OPG/RANKL蛋白量的表達，最后通過統(tǒng)計學(xué)分析OPG/RANKL表達量的比值變化。
　　 結(jié)果：①通過堿性磷酸酶染色法

3、，可見培養(yǎng)細胞胞漿內(nèi)有許多細小棕色顆粒的存在鑒定為成骨細胞；②MTT結(jié)果顯示，葛根素藥物濃度為1mg/ml，0.1mg/ml和0.01mg/ml時，作用成骨細胞時間為24小時后，對照相同濃度12小時和48小時處理組，MTT值顯示最明顯(1mg/ml:53.28±0.42，0.1mg/ml:66.13±0.55，0.01mg/ml:54.81±0.74)，與對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)；③堿性磷酸酶比色法結(jié)果證實，葛根素處理液

4、濃度1mg/ml，0.1mg/ml和0.01mg/ml作用成骨細胞24小時后，相比較相同濃度12小時和48小時組，堿性磷酸酶表達效果最好(1mg/ml:0.521±0.08，0.1mg/ml:0.612±0.03，0.01mg/ml:0.706±0.06)，與對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)；④RealtimePCR法檢測了成骨細胞OPG/RANKL的基因轉(zhuǎn)錄水平，1mg/ml，0.1mg/ml和0.01mg/ml三個葛根素處理

5、組，作用成骨細胞24小時后，OPG/RANKL基因轉(zhuǎn)錄比值為，1mg/ml:0.582±0.02，0.1mg/ml:0.823±0.03，0.01mg/ml:0.801±0.06，與對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；⑤WestemBlot法檢測了成骨細胞內(nèi)OPG/RANKL蛋白表達水平，1mg/ml，0.1mg/ml和0.01mg/ml三個葛根素處理組，作用成骨細胞24小時后，OPG/RANKL的比值為，1mg/ml:0.77±