雌激素對脂聯(lián)素調(diào)控人成骨細胞分化及OPG-RANKL表達的影響.pdf

1、第一部分、中國女性血清脂聯(lián)素、瘦素水平與骨密度及骨轉(zhuǎn)換生化指標的關(guān)系
　　 目的：作為脂肪組織分泌的主要循環(huán)肽，脂聯(lián)素和瘦素對骨代謝有著重要的影響，但它們與女性骨密度(BMD)的關(guān)系仍不太明確。本部分研究就女性血清脂聯(lián)素、瘦素水平與BMD及骨轉(zhuǎn)換生化指標的關(guān)系進行探討。
　　 方法：用ELISA測定265例絕經(jīng)前、336例絕經(jīng)后中國長沙地區(qū)健康成年女性血清脂聯(lián)素、瘦素、血清骨特異性堿性磷酸酶(BAP)和血清Ⅰ型膠原交聯(lián)氨

2、基末端肽(NTX)等生化指標；用雙能X射線吸收測定法(DXA)測定全身、腰椎L2-L4、總髖骨、總前臂的BMD以及脂重和瘦重；指標間的相關(guān)性采用Pearson's相關(guān)分析和偏相關(guān)分析，并用多元線性回歸模型分析哪些指標可作為BMD的獨立預(yù)測因子。
　　 結(jié)果：多元線性回歸分析表明，在絕經(jīng)后的中國女性，絕經(jīng)年限、瘦重、雌二醇(E2)和脂聯(lián)素均為BMD的獨立預(yù)測因子(P<0.05或P<0.01)，而脂重和瘦素則均不是BMD的獨立預(yù)測因

3、子；但在絕經(jīng)前的中國女性，脂聯(lián)素與脂重和瘦素一樣，也不是BMD的獨立預(yù)測因子。Pearson's相關(guān)分析表明，在絕經(jīng)后中國女性，脂聯(lián)素與血清BAP、血清NTX及NTX/BAP比值呈顯著正相關(guān)(均為P<0.05)，且這種相關(guān)性經(jīng)校正年齡和脂重后依然顯著(均為P<0.05)。
　　 結(jié)論：脂聯(lián)素是絕經(jīng)后中國女性BMD的獨立預(yù)測因子，并與骨轉(zhuǎn)換生化指標呈正相關(guān)；而在絕經(jīng)前中國女性，這種關(guān)系并不存在。這提示脂聯(lián)素對骨量產(chǎn)生負性作用，但脂

4、聯(lián)素的這一作用受絕經(jīng)狀態(tài)影響。
　　 第二部分、E2對脂聯(lián)素促人成骨細胞分化作用的影響
　　 目的：我們的研究表明，脂聯(lián)素對BMD的影響與女性絕經(jīng)狀態(tài)有關(guān)。這提示血循環(huán)中的雌激素水平影響了脂聯(lián)素對骨代謝的作用。本部分研究對雌激素(雌二醇，E2)在脂聯(lián)素促人成骨細胞(HOB)分化中的影響進行探討。
　　 方法：HOB用α-最小必需培養(yǎng)基(α-MEM)、含10μg/mL脂聯(lián)素的α-MEM或含10μg/mL脂聯(lián)素與10

5、-10～10-8M E2的α-MEM分別培養(yǎng)48小時，觀察E2不同劑量對脂聯(lián)素誘導(dǎo)成骨細胞分化的影響；用含10μg/mL脂聯(lián)素的α-MEM或含10μg/mL脂聯(lián)素與10-8M E2的α-MEM分別培養(yǎng)12～48小時以觀察E2不同作用時間對脂聯(lián)素誘導(dǎo)成骨細胞分化的影響；另外，在含10μg/mL脂聯(lián)素與10-8M E2的培養(yǎng)液中分別添加10ng/mL p38激酶激動劑或10-8M雌激素受體拮抗劑后，將細胞培養(yǎng)48小時，以觀察E2對脂聯(lián)素誘導(dǎo)

6、成骨細胞分化的影響是否被p38激酶激動劑和雌激素受體拮抗劑阻斷；分別用α-磷酸奈酚法檢測成骨細胞ALP、用放射免疫測定法(RLA)測定骨鈣素(OC)、甩Western Blot檢測p38和p-p38。
　　 結(jié)果：脂聯(lián)素促進成骨細胞ALP活性、OC分泌和p38激酶磷酸化，E2則抑制成骨細胞ALP活性、OC分泌(均為P<0.01)和p38激酶磷酸化；E2與脂聯(lián)素聯(lián)合干預(yù)時，ALP活性、OC分泌均隨E2濃度升高而降低(均為P<0.0

7、1)，p38激酶磷酸化水平也隨E2濃度升高而下降；而且，聯(lián)合干預(yù)的時間越長，成骨細胞ALP活性與分OC泌量降低得越明顯(P<0.05或P<0.01)。在添加p38激酶激動劑或雌激素受體拮抗劑的聯(lián)合干預(yù)組，成骨細胞ALP活性和OC分泌量均較未添加p38激酶激動劑(P<0.05)或雌激素受體拮抗劑組(P<0.01)增加。
　　 結(jié)論：E2通過抑制MAPK信號通路p38激酶的磷酸化抑制了脂聯(lián)素的促成骨細胞分化作用。
　　 第三

8、部分、E2對脂聯(lián)素調(diào)控人成骨細胞OPG和RANKL表達的影響
　　 目的：探討E2對脂聯(lián)素調(diào)控HOB護骨素(OPG)與核因子κB受體活化因子配體(RANKL)表達的影響。
　　 方法：HOB用α-MEM、含10μg/mL脂聯(lián)素或含10μg/mL脂聯(lián)素與10-10～10-8M E2的α-MEM分別培養(yǎng)48小時，觀察E2不同的劑量對脂聯(lián)素調(diào)控成骨細胞OPG和RANKL表達的影響；用含10μg/mL脂聯(lián)素與10-8M E2的α

9、-MEM分別培養(yǎng)12～48小時以觀察E2不同的作用時間對脂聯(lián)素調(diào)控成骨細胞OPG和RANKL表達的影響；另外，在含10μg/mL脂聯(lián)素與10-8M E2的培養(yǎng)液中分別添加10ng/mL p38激酶激動劑或10-8M雌激素受體拮抗劑后，將細胞培養(yǎng)48小時，以觀察E2對脂聯(lián)素調(diào)控成骨細胞OPG/RANKL的影響是否被p38激酶激動劑和雌激素受體拮抗劑阻抑；用實時定量PCR(RT-PCR)和酶聯(lián)免疫分析(ELISA)檢測成骨細胞OPG和RAN

10、KL mRNA及其蛋白表達。
　　 結(jié)果：脂聯(lián)素抑制成骨細胞OPG mRNA表達和蛋白分泌而促進成骨細胞RANKL mRNA表達和蛋白分泌；相反，E2則促進成骨細胞OPG mRNA表達和蛋白分泌而抑制RANKL mRNA表達和蛋白分泌(均為P<0.01)；脂聯(lián)素與E2共同干預(yù)時，成骨細胞OPG mRNA表達和蛋白分泌隨E2濃度升高而升高，而RANKLmRNA表達和蛋白分泌則隨E2濃度升高而降低(P<0.05或P<0.01)；而且

11、，聯(lián)合干預(yù)的時間越長，E2對成骨細胞OPG mRNA表達和蛋白分泌的促進以及對RANKL mRNA表達和蛋白分泌的抑制作用越明顯；與未添加p38激酶激動劑或雌激素受體拮抗劑的培養(yǎng)細胞相比，添加p38激酶激動劑或雌激素受體拮抗劑的培養(yǎng)細胞OPG mRNA表達和蛋白分泌均下降，而RANKL mRNA表達和蛋白分泌均升高(均為P<0.01)。
　　 結(jié)論：E2通過MAPK/p38途徑阻滯脂聯(lián)素對成骨細胞OPG/RANKL表達的調(diào)控，從