兒童化膿性腦膜炎臨床分析及發(fā)病機(jī)制初步探討.pdf

1、研究背景與目的：
　　化膿性腦膜炎(purulent meningitis)，簡稱化腦，是小兒時(shí)期較為常見的神經(jīng)系統(tǒng)感染，在抗生素應(yīng)用于臨床以前，本病大多為致死性的。隨著以抗生素為主的綜合治療措施的臨床應(yīng)用，化腦的預(yù)后已大為改觀，但仍有較高的死亡率，神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥也較為常見。早期診斷和適當(dāng)干預(yù)，是降低本病死亡率和后遺癥發(fā)生率的關(guān)鍵。
　　腦膜炎癥的刺激和血管炎均可引起腦實(shí)質(zhì)的水腫、壞死，促使細(xì)胞因子釋放和毛細(xì)血管通透性增加，

2、加上廣泛炎癥性病變使腦脊液循環(huán)發(fā)生障礙，這些因素均可引起腦水腫和顱壓增高，重者可發(fā)生腦疝。
　　國外有文獻(xiàn)提到，化膿性腦膜炎的實(shí)質(zhì)是強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，在化膿性腦膜炎炎癥過程中，炎性細(xì)胞釋放出大量細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)等，其可以使炎癥反應(yīng)進(jìn)一步加劇，由細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在腦脊液細(xì)菌已清除后仍可繼續(xù)存在，這可能是化腦發(fā)生慢性炎癥后遺癥的原因之一。那么TNF-α又是怎么

3、參與化膿性腦膜炎的炎癥過程的呢？
　　血腦屏障是一層連續(xù)覆蓋99％腦毛細(xì)血管腔表面的內(nèi)皮細(xì)胞膜，對于維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定具有重要的意義。腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(BMECs)之間的緊密連接是血腦屏障的結(jié)構(gòu)與功能的基礎(chǔ)，各種內(nèi)、外源的信號通路通過調(diào)節(jié)這些蛋白達(dá)到對血腦屏障通透性的調(diào)節(jié)。研究表明外傷、缺血缺氧、感染、免疫及理化因素等均可能引起緊密連接結(jié)構(gòu)及功能發(fā)生改變，造成BBB損害，從而導(dǎo)致BBB通透性升高引起腦水腫。血腦屏障(Bl

4、ood-brain barrier, BBB)通透性增加致血管源性腦水腫在其發(fā)病中起關(guān)鍵作用，有文獻(xiàn)報(bào)道，前炎性腫瘤壞死因子α（TNF-α）可以引起腸上皮細(xì)胞的通透性增高，那么，其是否也能引起腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加呢？本研究通過分析化膿性腦膜炎的臨床特征，及化膿性腦膜炎患兒腦脊液中TNF-α的變化，而后利用永生化小鼠Bend.3細(xì)胞建立腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞屏障模型，用TNF-α處理后，觀察其對血腦屏障通透性的影響，初步探討了化膿性腦膜炎

5、的發(fā)病機(jī)制。
　　研究方法：
　　1、對30例化膿性腦膜炎患兒及對照組進(jìn)行臨床資料及診治分析確立診斷標(biāo)準(zhǔn)（入組條件），并根據(jù)患兒臨床資料總結(jié)分析患兒臨床表現(xiàn)、體征及神經(jīng)系統(tǒng)受累征象、腦脊液改變、影像學(xué)資料、腦電、易感因素、對治療的反應(yīng)等臨床特征。
　　2、對所有患兒及對照組腦脊液中的TNF-α進(jìn)行測定
　　病例組30名患兒，對照組10名，年齡性別差無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分別以雙抗體酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）來測定實(shí)驗(yàn)

6、對象腦脊液標(biāo)本中TNF-α含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。記錄數(shù)值。
　　3、Bend.3細(xì)胞培養(yǎng)
　　用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)Bend.3細(xì)胞，在5％CO2，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，約3 d細(xì)胞基本融合。以1×10 cells/L的密度將Bend.3細(xì)胞懸液0.3mL接種于細(xì)胞培養(yǎng)插入皿內(nèi)池，并于外池加入完全培養(yǎng)基1.2mL，保證內(nèi)外池兩側(cè)液面相等，倒置相差顯微鏡下每日觀察bEnd.3細(xì)胞形態(tài)變化。
　　4、腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(B

7、MECs)屏障模型的建立
　　Bend.3細(xì)胞的TEER隨培養(yǎng)時(shí)間的延長逐漸升高，在培養(yǎng)10d后，穩(wěn)定于一個(gè)較高的水平。細(xì)胞培養(yǎng)3d時(shí)，鏡下見細(xì)胞基本匯合，TEER值為37.33±3.05，繼續(xù)培養(yǎng)到第10d，細(xì)胞TEER值增加至82.33±6.03Ω·cm2，培養(yǎng)10d后，細(xì)胞TEER維持在與10d相近的讀數(shù)，提示(BMECs)屏障模型的建立。
　　5、TNT-α處理后對Bend.3細(xì)胞的通透性影響
　　用TNF-α

8、處理分別3、6、12、24h，觀察各組Bend.3細(xì)胞(BMECs屏障)TEER值的改變。
　　研究結(jié)果：
　　1、所選取的30例患兒均符合化膿性腦膜炎診斷
　　所選取的30例患兒均符合細(xì)菌性腦膜炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，所有30例患兒病原學(xué)確診3例，占10.0％，臨床符合診斷23例，占76.6％，臨床可疑診斷4例，占13.3％，均符合化膿性腦膜炎診斷。
　　2、化膿性腦膜炎患兒腦脊液TNF-α顯著升高，且與并發(fā)癥相關(guān)?；撔?/p>

9、腦膜炎患兒腦脊液中TNF-α較對照組病例顯著升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。且化膿性腦膜炎病例組兩組患兒之間TNF-α水平比較，出現(xiàn)并發(fā)癥組較之未出現(xiàn)并發(fā)癥組也有明顯升高，兩者差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3、TNF-α導(dǎo)致Bend.3細(xì)胞的TEER降低，且具有時(shí)間依賴性加入10μ g/L TNF-α作用3h后，Bend.3細(xì)胞TEER值下降至(68±1.5Ω·cm2)，與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)

10、，隨著TNF-α作用時(shí)間的延長，TEER值進(jìn)一步下降，6h為(501.3Ω·cm2)，12h為(41±0.3Ω·cm2)，24h達(dá)到最低(36±2.0Ω·cm2)，與對照組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　研究結(jié)論：
　　1.化膿性腦膜炎是重要的CNS感染性疾病，易導(dǎo)致并發(fā)癥。在抗生素為主的綜合臨床治療后，后遺癥的發(fā)生率仍高，本研究中并發(fā)癥率達(dá)30％。
　　2.TNF-α參與的炎癥瀑布性級聯(lián)反應(yīng)，是化膿性腦膜炎患兒出現(xiàn)