高滲對(duì)小鼠內(nèi)髓集合管細(xì)胞中尿素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A2和水通道蛋白2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：尿素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A2(ureatransporterA2,UT-A2)和水通道蛋2(aquaporin2,AQP2)在哺乳動(dòng)物腎臟組織表達(dá),參與尿液濃縮。本實(shí)驗(yàn)研究,高滲是否調(diào)節(jié)UTA2和AQP2在小鼠內(nèi)髓集合管(mouseinnermedullarycollectingduct,mIMCD3)細(xì)胞中的表達(dá)。
　　方法：分別用UTA2-GFP-pCMV6和AQP2-GFP-pCMV6質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染mIMCD3細(xì)胞,建立UTA2-m

2、IMCD3和AQP2-mIMCD3穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。分別用單純氯化鈉(sodiumchloride,NaCl)、單純尿素、NaCl聯(lián)合尿素的高滲培養(yǎng)基刺激穩(wěn)轉(zhuǎn)和未穩(wěn)轉(zhuǎn)的mIMCD3細(xì)胞。采用免疫熒光和免疫印記鑒定UTA2和AQP2在穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系中的表達(dá),采用熒光實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄PCR(fluorescence-basedreal-timereversetranscription-PCR,RT-PCR)檢測(cè)UTA2和AQP2在mIMCD3細(xì)胞中的mRN

3、A表達(dá)水平,用免疫印跡檢測(cè)UTA2和AQP2在mIMCD3細(xì)胞的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：?jiǎn)渭僋aCl、單純尿素、NaCl聯(lián)合尿素高滲刺激上調(diào)AQP2-mIMCD3細(xì)胞中AQP2的mRNA和蛋白表達(dá)水平,單純NaCl、NaCl聯(lián)合尿素高滲刺激同樣上調(diào)UTA2-mIMCD3細(xì)胞中UTA2的mRNA和蛋白表達(dá)水平,并且滲透壓越高,AQP2和UTA2表達(dá)越多。但是單純尿素刺激對(duì)UTA2-mIMCD3細(xì)胞中UTA2的表達(dá)無明顯影響。NaC