β2糖蛋白I免疫對(duì)小鼠脾臟T細(xì)胞亞群分化的影響.pdf

1、目的:
　　抗β2GPI抗體可以通過誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞、血小板等細(xì)胞產(chǎn)生促血栓和促炎因子參與抗磷脂綜合征(antiphospholipidsyndrome，APS)的病理進(jìn)程和臨床癥狀的產(chǎn)生。本課題組前期研究表明，β2GPI能通過活化TLR4誘導(dǎo)小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(bonemarrow-derived dendritic cells，BMDCs)成熟。但是，對(duì)β2GPI免疫后引起抗β2GPI抗體生成的機(jī)制仍有待進(jìn)一步闡明。

2、在前期研究和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的基礎(chǔ)上，本研究以β2GPI免疫前后小鼠血清中抗β2GPI抗體水平變化和脾臟T細(xì)胞分化相關(guān)指標(biāo)的變化為切入點(diǎn)，對(duì)抗β2GPI抗體的產(chǎn)生機(jī)制和Toll樣受體4(Toll-like receptor4，TLR4)在其中的作用進(jìn)行探討。
　　方法:
　　(1)酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）檢測(cè)經(jīng)β2GPI免疫的Balb/c小鼠、 C3H/H

3、eN小鼠（TLR4表達(dá)正常）、C3H/HeJ小鼠（TLR4表達(dá)缺陷）和生理鹽水處理的Balb/c小鼠血清中的抗β2GPI抗體水平。
　　(2)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time quantitative PCR，RT-qPCR)檢測(cè)經(jīng)β2GPI免疫的Balb/c小鼠、C3H/HeN小鼠、C3H/HeJ小鼠和生理鹽水處理的Balb/c小鼠脾臟細(xì)胞中GATA3、IL-4、T-bet、IFN-γ、Foxp3的mRNA水平。
　

4、　(3)流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)經(jīng)β2GPI免疫的Balb/c小鼠、C3H/HeN小鼠、C3H/HeJ小鼠和生理鹽水處理的Balb/c小鼠脾臟細(xì)胞中GATA3陽性細(xì)胞和Foxp3陽性細(xì)胞的比例。
　　結(jié)果:
　　(1)在β2GPI免疫2次后，即可在Balb/c小鼠的血清中檢測(cè)到高效價(jià)(1∶100，000)的抗β2GPI抗體，而在β2GPI免疫4次后，血清中抗β2GPI抗體的效價(jià)進(jìn)一步升高(＞1∶

5、100，000)。
　　(2)β2GPI免疫2次后，Balb/c小鼠脾臟細(xì)胞中Th2細(xì)胞相關(guān)因子GATA3和IL-4的mRNA水平較生理鹽水處理的Balb/c小鼠升高(p＜0.05);β2GPI免疫4次后，小鼠脾臟細(xì)胞中IL-4的mRNA水平仍舊高于生理鹽水處理的Balb/c小鼠(p＜0.05)，但GATA3、T-bet和Foxp3的mRNA較生理鹽水處理的Balb/c小鼠降低(p＜0.05)。而無論經(jīng)過β2GPI免疫2次還是4次

6、，Balb/c小鼠脾臟細(xì)胞中IFN-γ的mRNA水平與生理鹽水處理的Balb/c小鼠均無顯著差異。
　　(3)β2GPI免疫2次后，Balb/c小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中GATA3陽性細(xì)胞比例高于生理鹽水處理的Balb/c小鼠(p＜0.05)。β2GPI免疫4次后，Balb/c小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中GATA3陽性細(xì)胞比例高于生理鹽水處理的Balb/c小鼠(p＜0.05)，而Foxp3陽性細(xì)胞比例低于于生理鹽水處理的Balb/c小鼠(p＜0.0

7、5)。
　　(4)在β2GPI免疫后，C3H/HeN小鼠相對(duì)C3H/HeJ小鼠能在血清中檢測(cè)到更高水平的抗β2GPI抗體(p＜0.05)。
　　(5)β2GPI免疫后， C3H/HeN小鼠脾臟細(xì)胞中GATA3和IL-4的mRNA水平相對(duì)C3H/HeJ小鼠升高(p＜0.05)，而T-bet、IFN-γ、Foxp3的mRNA水平相對(duì)C3H/HeJ小鼠降低(p＜0.05)。
　　(6)β2GPI免疫后，C3H/HeN小鼠脾臟

8、淋巴細(xì)胞中GATA3陽性細(xì)胞比例高于C3H/HeJ小鼠(p＜0.05)，而Foxp3陽性細(xì)胞比例低于C3H/HeJ小鼠(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)β2GPI免疫小鼠能誘導(dǎo)高效價(jià)抗β2GPI抗體生成和Th2型免疫應(yīng)答的活化，且免疫應(yīng)答強(qiáng)度和免疫次數(shù)有關(guān)。
　　(2)β2GPI免疫后，C3H/HeN小鼠相對(duì)C3H/HeJ小鼠在血清中存在更高水平的抗β2GPI抗體，且在mRNA水平和細(xì)胞水平均能檢測(cè)到更強(qiáng)的Th