益艾康膠囊對FLV感染小鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響.pdf

1、目的:通過建立Friend型鼠白血病病毒(FLV)引起的BALB/C小鼠所致的免疫缺陷動物模型,選取脾指數(shù)、胸腺指數(shù)、T細(xì)胞亞群角度來研究益艾康膠囊提高免疫功能的機(jī)理,為中醫(yī)藥艾滋病實驗研究奠定基本思路,為今后推廣益艾康膠囊提供充分的實驗室依據(jù)。
　　方法:①首先對從美國ATCC引進(jìn)的FLV毒株進(jìn)行病毒傳代:BALB/C小鼠,每只腹腔注射0.5ml,14日后處死小鼠,剖取脾臟,制成脾懸液,離心,傳代兩次,經(jīng)鼠脾適應(yīng)后毒力增強(qiáng),鼠脾

2、適應(yīng)株制備完成。②病毒滴度ID50測定:解凍先前制作的脾懸液,分別進(jìn)行原液的101倍,102倍,103倍,104倍,105倍稀釋。用以上6個濃度脾懸液腹腔注射,感染小鼠,每只0.5ml。正常組小鼠腹腔注射相等劑量的生理鹽水。三周后,稱量小鼠體重,處死小鼠。按照脾指數(shù)大于正常組小鼠脾指數(shù)的均數(shù)+3倍標(biāo)準(zhǔn)差為標(biāo)準(zhǔn)為陽性。按照按Reed和Muench氏法計算ID50。③實驗1:益艾康膠囊對FLV小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)的影響。腹腔注射0.4mlx

3、10-1FLV病毒原液攻毒后,隨機(jī)分為FLV模型組、ATZ對照組組、唐草片對照組、益艾康膠囊大劑量組,益艾康膠囊中劑量組、益艾康膠囊小劑量組。攻毒當(dāng)日開始灌胃口服給藥益艾康大中小劑量組分別給予4g/kg/d,2g/kg/d,1g/kg/d劑量灌胃,模型組灌以等量生理鹽水,ATZ組按200mg/kg體重灌胃,連續(xù)21d。無菌取脾,以電子天平精密稱取其重量,以脾/胸腺重除以體重×100即為脾/胸腺指數(shù)。④實驗2:益艾康膠囊對T細(xì)胞亞群的影響

4、。動物的分組及模型復(fù)制方法同實驗1,小鼠給藥21天后,末次給藥后1小時,眼球取血,以EDTA抗凝。每只小鼠取50ulEDTA抗凝血分別與CD4、CD3、CD44、CD62L以及CD8、CD3、CD44、CD62L均勻混合,室溫下靜置反應(yīng)15min。各管中加人FACS溶紅細(xì)胞液,充分混勻,室溫靜置反應(yīng)12min后,1500rpm離心5min,棄除上清液,并于各試管中加入500μLPBS,重懸成單細(xì)胞懸液,用流式細(xì)胞儀檢T細(xì)胞亞群,包括CD

5、4T淋巴細(xì)胞、CD8T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8比值、CD4T初始細(xì)胞亞群(CD62LhighCD44low)、CD4T記憶細(xì)胞亞群(CD62LlowCD44high)。CD8T初始細(xì)胞亞群(CD62LhighCD44low),CD8T記憶細(xì)胞亞群(CD62LlowCD44high)
　　結(jié)果:
　　1.益艾康膠囊對FLV所致免疫缺陷小鼠脾指數(shù),胸腺指數(shù)的影響
　　脾重和脾指數(shù)結(jié)果顯示:與模型組相比,益艾康組和唐草片組對

6、脾大均有較好的抑制作用,但效果稍遜于AZT組,AZT組脾重接近正常組。AZT組能最小程度的減少脾指數(shù)。益艾康膠囊組和唐草片組也能減少脾指數(shù),兩者沒有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　胸腺重及胸腺指數(shù)結(jié)果顯示:模型組胸腺重最小,胸腺受抑制明顯。AZT組胸腺重量接近于正常對照組。益艾康組與唐草片組亦能增加胸腺重量,兩者之間沒有差異。AZT組能明顯的改善胸腺指數(shù),接近正常對照組。益艾康組和唐草片組增加胸腺指數(shù)方面沒有差異。
　　2.益艾康膠囊對F

7、LV所致免疫缺陷小鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響
　　CD4+T淋巴細(xì)胞:益艾康膠囊與模型對照組相比,具有升高CD4+T細(xì)胞的作用(P<0.05),益艾康各組升高CD4+T淋巴細(xì)胞作用和唐草片組之間無差異(P>0.05)。AZT組與模型組對比有顯著的差異(P<0.01)。
　　CD8+T淋巴細(xì)胞:益艾康組與模型組相比并無明顯的差異,和AZT之間也無差異,而唐草片組則與模型組有顯著差異。唐草片有顯著的升高CD8+T淋巴細(xì)胞的作用。

8、r>　　CD4/CD8的比值:益艾康大中劑量組和AZT組能升高CD4/CD8比值,但益艾康膠囊大中劑量組和AZT組相比仍有一定的差距。而唐草片CD4/CD8比值接近于模型組。
　　純真T淋巴細(xì)胞亞群(CD44hiCD62lo)方面:益艾康膠囊對CD4T純真細(xì)胞和模型組沒有差異,而AZT卻與益艾康作用相反,和模型組比有統(tǒng)計學(xué)意義,CD4T純真亞群較高。唐草片組與益艾康膠囊沒有統(tǒng)計學(xué)意義。同樣CD8T純真亞群結(jié)果和CD4T結(jié)果一致,益

9、艾康膠囊和唐草片對純真亞群沒有影響,AZT則有顯著的影響。
　　記憶T淋巴細(xì)胞亞群方面(CD44loCD62hi):益艾康膠囊對CD8和CD4T記憶細(xì)胞有著明顯的效果,和模型組相比有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義,而AZT對記憶亞群和模型組相比沒有統(tǒng)計學(xué)差異,唐草片組也能提高記憶亞群,但是效果不如益艾康膠囊組。
　　結(jié)論:
　　1.益艾康膠囊可以抑制FLV所致免疫缺陷小鼠的脾腫大,并降低脾指數(shù),保護(hù)脾臟,效果好于唐草片但遜于AZT組