蛋白激酶C-α對水通道蛋白2轉(zhuǎn)運(yùn)的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、目的：蛋白激酶Cα（PKCα）參與尿濃縮功能的調(diào)節(jié)，但具體機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)研究PKCα對水通道蛋白2（aquaporin 2，AQP2）轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞骨架（cytoskeleton，CSK）的分布的作用。
　　 方法：構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染AQP2-GFP融合蛋白的小鼠內(nèi)髓集合管上皮細(xì)胞（mIMCD3）株，采用免疫印跡技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率；體外培養(yǎng)AQP2-GFP mIMCD3細(xì)胞，使用脂質(zhì)體2000分別轉(zhuǎn)染PKCαshRNA質(zhì)粒、PKCα顯

2、性激活型質(zhì)粒（PKCαA25E）及PKCαscramble shRNA陰性對照質(zhì)粒，48h后收集部分細(xì)胞行免疫印跡檢測轉(zhuǎn)染效率，部分細(xì)胞使用去氨加壓素（DdAVP）刺激，分別收集刺激后0分鐘、30分鐘、以及DdAVP刺激30分鐘后洗脫2小時(shí)細(xì)胞，采用免疫熒光共聚焦技術(shù)檢測AQP2以及微管的分布變化。
　　 結(jié)果：成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)AQP2-GFP的mIMCD3細(xì)胞株；使用PKCαshRNA轉(zhuǎn)染AQP2-mIMCD3細(xì)胞后，轉(zhuǎn)染組