模擬失重條件對(duì)大鼠腎小管水通道蛋白2表達(dá)影響的研究.pdf

1、水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)是水分子跨越細(xì)胞的快速轉(zhuǎn)運(yùn)通道,廣泛分布于機(jī)體組織細(xì)胞,主要介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)外的水分子運(yùn)輸,對(duì)維持細(xì)胞內(nèi)水平衡具有重要作用。AQPs的發(fā)現(xiàn)不僅從分子水平揭示水跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)的機(jī)制,而且也揭示水平衡在遺傳性及獲得性疾病時(shí)的病理生理機(jī)制。它在全身各個(gè)器官組織中都有表達(dá),以腎臟分布種類最多,研究表明至少有AQPl、2、3、4、6、7、8、11這8種水通道蛋白在腎臟表達(dá),這些選擇性的表達(dá)在腎單位細(xì)胞質(zhì)膜和腎小

2、血管的水通道蛋白在尿濃縮機(jī)制中起著至關(guān)重要的作用?，F(xiàn)已明確AQP1-4是腎臟重吸收水、濃縮尿液、維持機(jī)體水平衡的主要分子基礎(chǔ)。其中AQP2是腎臟集合管柱狀上皮細(xì)胞內(nèi)最重要的水通道蛋白，也是迄今為止發(fā)現(xiàn)的唯一在細(xì)胞內(nèi)分布受抗利尿激素(ADH)調(diào)控的水通道蛋白。目前已證實(shí)AQP2在腎小管濃縮、重吸收功能中起著關(guān)鍵的作用。本課題就模擬失重條件下大鼠腎小管水通道蛋白2的表達(dá)變化展開相關(guān)研究。
　　目的:利用尾吊模型,模擬失重條件,探討在模

3、擬失重條件下大鼠腎小管水通道蛋白2表達(dá)的變化,并結(jié)合腎臟的電鏡超微結(jié)構(gòu),抗利尿激素的表達(dá)以及腎功能的改變,研究失重條件下水通道蛋白的表達(dá)變化與腎小管功能損傷的關(guān)系。
　　方法:采用尾部懸吊法建立失重模型。48只健康雄性wistar大鼠分為對(duì)照組及尾吊3天組、尾吊5天組、尾吊7天組、尾吊2周組、尾吊4周組。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開始尾吊。分別于觀察終點(diǎn)處死各組大鼠,處死前留取尿標(biāo)本,檢測尿滲透壓。斷頭取血,離心后取血漿檢測腎功能及血清抗利

4、尿激素。剝離腎臟組織,分離腎皮質(zhì)和髓質(zhì)。電鏡觀察腎小管超微結(jié)構(gòu)。免疫熒光法及western bolt方法檢測AQP2的表達(dá)。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清中抗利尿激素的水平。
　　結(jié)果:1.電鏡下尾吊組大鼠腎臟主要表現(xiàn)為腎小管不同程度受損,其中以尾吊5天組大鼠腎小管損傷最嚴(yán)重。
　　2.免疫熒光結(jié)果顯示尾吊組大鼠腎臟AQP2表達(dá)的熒光較對(duì)照組均升高,亮度增強(qiáng),其中以尾吊5天組大鼠腎臟AQP2表達(dá)條帶最亮。
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5、.western bolt結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組AQP2的表達(dá)較對(duì)照組均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其中尾吊5天組大鼠腎臟AQP2表達(dá)最明顯。
　　4.尾吊5天組尿滲透壓顯著升高,與其他各組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。各組間ADH及腎功能指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　5.AQP2蛋白表達(dá)量與尿滲透壓呈正相關(guān)(r=0.468,P=0.003)。
　　結(jié)論:模擬失重條件能引起大鼠腎小管損傷,腎小