雷帕霉素在6-羥基多巴誘導(dǎo)的帕金森病細(xì)胞及大鼠模型中的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名：燃日雷帕霉素在6#k基多巴誘導(dǎo)的帕金森病細(xì)胞及大鼠模型中的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制研究中文摘

2、要中文摘要【目的】帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，線粒體氧化應(yīng)激和神經(jīng)元凋亡在PD的病理機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。雷帕霉素(rapamycin)為雷帕霉素靶蛋Et(Targetofrapamycin，TOR)信號(hào)通路特異性抑制劑，在一系列神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病的病理機(jī)制及治療中具有重要的意義。本研究通過雷帕霉素預(yù)處理PD大鼠及細(xì)胞模型，揭示其在PD中的神經(jīng)保護(hù)作用，并探討其機(jī)制。【方法】動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)

3、SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、PD模型組、雷帕霉素低劑量組(005mg／kg／d)、中劑量組(05mg／kg／d)及高劑量紅I(5mg／kg／d)進(jìn)行雷帕霉素灌胃預(yù)處理。7天后，向模型組和所有雷帕霉素預(yù)處理組大鼠腦部右側(cè)紋狀體兩點(diǎn)定向注射6羥基多E(6一hydroxydopamine，6OHDA)(41tg／gl，21上1／注射點(diǎn))誘導(dǎo)建立PD大鼠模型，假手術(shù)組大鼠注射生理鹽水作為對(duì)照。術(shù)后第25天各組大鼠均用阿撲嗎啡(05mg／kg)誘導(dǎo)

4、旋轉(zhuǎn)試驗(yàn)，檢測行為學(xué)指標(biāo)；在造模后第28天，各組大鼠經(jīng)心臟灌注固定，取腦組織進(jìn)行黑質(zhì)紋狀體酪氨酸羥化酶(Tyrosinehydroxylase，TH)免疫組化染色及透射電子顯微鏡觀察；檢測各組SD大鼠中腦丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase，GSHPX)活性；提取腦組織總RNA后，采用RTPC

5、R方法檢測黑質(zhì)紋狀體內(nèi)Bax、Bcl2和p47p№“等基因mRNA的表達(dá)；同時(shí)采用westemblot方法檢測黑質(zhì)紋狀體內(nèi)Bax、Bcl一2、細(xì)胞色素c以及cleavedcaspase9蛋白質(zhì)的表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)：采用不同濃度6OHDA誘導(dǎo)24h后檢測PCI2細(xì)胞存活率，建立PD細(xì)胞模型。不同濃度雷帕霉素預(yù)處理PCI2細(xì)胞3h、6h、12h和24h，100pM濃度6OHDA誘導(dǎo)24h后，使用CCK8細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒檢測PCI2細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)的