富硒女貞子對熱應激乳腺、卵巢組織及其細胞的影響.pdf

1、熱應激是指動物機體處于高溫環(huán)境中所做出的非特異性生理反應的總和，本研究團隊的前期成果表明，富硒女貞子對熱應激性免疫失衡和自由基爆發(fā)性損傷具有顯著療效，在此基礎上，本文探究富硒女貞子對熱應激雌性小鼠乳腺、卵巢組織發(fā)育的影響，并從細胞水平探索富硒女貞子對細胞熱應激的干預作用，為闡明富硒女貞子抗熱應激的分子機理打下基礎。
　　試驗一 富硒女貞子對熱應激雌鼠乳腺及卵巢組織的影響
　　探討富硒女貞子對熱應激小鼠乳腺以及卵巢組織發(fā)育的影

2、響，試驗選取16只C57BL/6雌鼠，隨機分為4組:對照組(C)、熱應激組(HS)、富硒女貞子組(SLL)、普通女貞子(PLL)組。C組小鼠于T:25±1℃室溫下飼養(yǎng);其他3組小鼠于每天13:00-14:00置于生化培養(yǎng)箱內(nèi)(通氣良好，T:41±1℃，RH:50-60％)應激1h，期間不間斷供水供藥，其中SLL組小鼠飼喂0.75g/Kg富硒女貞子水煎液，PLL組小鼠飼喂1.5g/Kg普通女貞子水煎液。其余時間與C組同環(huán)境條件下飼養(yǎng)，連續(xù)

3、應激7d，最后一次應激后1h剖殺，采集乳腺、卵巢組織，制作石蠟切片，H.E染色、觀察。結(jié)果表明，HS組小鼠乳腺組織中發(fā)育的腺泡和導管明顯少于C組，而SLL組小鼠乳腺組織中發(fā)育的腺泡和導管較HS組明顯增多。此外，HS組小鼠卵巢中卵泡數(shù)量較C組顯著減少（P＜0.05），而SLL組小鼠卵巢中卵泡數(shù)量較HS組有所增多，但差異并不顯著（P＞0.05）。結(jié)果提示，富硒女貞子對熱應激引起的小鼠乳腺及卵巢組織發(fā)育不良有明顯的改善作用。
　　試驗二

4、 富硒女貞子對乳腺及卵巢細胞增殖活性的影響
　　以富硒女貞子水煎液及其主要成分蛋白質(zhì)、齊墩果酸、多糖為試驗材料，探究其對體外培養(yǎng)的乳腺上皮細胞、卵巢細胞增殖活性的影響。采用MTT法測定富硒女貞子水煎液及其主要成分對乳腺上皮細胞、卵巢細胞生長的安全濃度，并測定在安全濃度下12h、24h、36h、48 h時間點各藥物對乳腺上皮細胞、卵巢細胞增殖的影響。結(jié)果表明，富硒女貞子水煎液、蛋白質(zhì)及齊墩果酸對乳腺上皮細胞的增殖活性具有促進作用，而

5、富硒女貞子多糖并沒有表現(xiàn)類似作用，且當濃度達到20μg/mL時對細胞的生長表現(xiàn)出抑制作用;富硒女貞子水煎液、蛋白質(zhì)、多糖、齊墩果酸均能促進卵巢細胞增殖活性。
　　試驗三 富硒女貞子對熱應激乳腺上皮細胞增殖、凋亡及抗氧化功能的影響
　　為探究富硒女貞子及其主要成分對高溫體外培養(yǎng)乳腺上皮細胞增殖、凋亡及抗氧化功能的影響。以42℃作為熱應激溫度，37℃作為對照溫度。于42℃培養(yǎng)的乳腺上皮細胞分別添加不同濃度的富硒女貞子水煎液、齊墩

6、果酸、蛋白質(zhì)，檢測細胞增殖活性、細胞凋亡比例及細胞培養(yǎng)上清中SOD活性。結(jié)果表明，各濃度的富硒女貞子水煎液、齊墩果酸及蛋白質(zhì)均能顯著提高熱應激狀態(tài)下乳腺上皮細胞的增殖活性(P＜0.05)、顯著降低細胞的凋亡率(P＜0.05)、顯著提高細胞培養(yǎng)上清中SOD的活性（P＜0.05），且富硒女貞子組明顯優(yōu)于普通女貞子組。結(jié)果提示，富硒女貞子水煎液、齊墩果酸及蛋白質(zhì)對熱應激引起的乳腺細胞增殖活性降低及細胞凋亡有明顯的改善作用，并能提高熱應激狀態(tài)下

7、乳腺細胞的抗氧化功能。
　　試驗四 富硒女貞子對熱應激卵巢細胞生長、凋亡及抗氧化的影響
　　為探究富硒女貞子及其主要成分對高溫體外培養(yǎng)卵巢細胞增殖、凋亡及抗氧化功能的影響。按上述細胞熱應激模型和檢測方法試驗，結(jié)果表明，富硒女貞子水煎液及多糖能顯著提高熱應激狀態(tài)下卵巢細胞的增殖活性(P＜0.05)、顯著降低細胞的凋亡率（P＜0.05）、顯著提高細胞培養(yǎng)上清中SOD的活性(P＜0.05)，且富硒女貞子組明顯優(yōu)于普通女貞子組;而富