IMP-重組蛋白純化、遺傳環(huán)境及產(chǎn)IMP-38菌株毒力基因研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:①獲得并純化金屬酶新亞型IMP-38重組蛋白。②探討IMP-38基因的遺傳環(huán)境。③了解產(chǎn)IMP-38肺炎克雷伯菌菌株毒力基因分布。
  方法:⑴構(gòu)建PUC19/IMP-38重組質(zhì)粒驗(yàn)證IMP-38基因序列。⑵構(gòu)建原核表達(dá)載體pet-28a+/IMP-38,對(duì)目的基因誘導(dǎo)表達(dá)、純化及復(fù)性。⑶提取9株產(chǎn)IMP-38菌株基因組DNA,采用普通PCR、長(zhǎng)片段PCR和重疊延伸PCR探討IMP-38基因與整合子、轉(zhuǎn)座子關(guān)系。⑷提取9株產(chǎn)

2、IMP-38菌株基因組DNA,PCR檢測(cè)7種莢膜血清型基因和25種毒力基因。
  結(jié)果:①成功構(gòu)建PUC19/IMP-38重組質(zhì)粒,證明前期測(cè)序結(jié)果完全正確,確定本研究IMP基因?yàn)镮MP新亞型-IMP-38。②成功構(gòu)建原核表達(dá)載體pet-28a+/IMP-38,目的基因大量表達(dá)且獲得純度較高的重組蛋白。③IMP-38基因位于Ⅰ類(lèi)整合子上,后者位于轉(zhuǎn)座子Tn402-like上。產(chǎn)IMP-38菌株上攜帶mer1696操縱子、Tn505

3、1轉(zhuǎn)座子,且存在tnp513、IS26、tnpU和IS5075等遺傳標(biāo)記。④9株產(chǎn)IMP-38肺炎克雷伯菌中發(fā)現(xiàn)了4株產(chǎn)9種毒力基因菌株,分別為fimH1、mrkD、ycfm、kpn、entB、irp-2、uge、wabG和ureA,未發(fā)現(xiàn)其他毒力基因和上述莢膜血清型基因。
  結(jié)論:⑴本研究IMP基因?yàn)镮MP新亞型-IMP-38。⑵成功構(gòu)建原核表達(dá)載體pet-28a+/IMP-38,獲得純化的重組蛋白。⑶IMP-38基因位于Ⅰ類(lèi)

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